科研产出
利用PCR产物确定杂交水稻品种与亲本间的亲缘关系
《杂交水稻 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：以杂种F_1代两优336、德两优华占及两优336的母本C815S及父本R336为材料,利用中华人民共和国农业行业标准(NY/T 1433—2014)水稻品种真实性鉴定所采用的48对SSR引物进行PCR扩增,确定杂交水稻品种与双亲之间的亲缘关系。结果表明,利用双亲混合DNA与杂种F_1样品DNA的PCR扩增产物进行比较,可以鉴定出杂交水稻品种与双亲之间的亲缘关系。该方法不仅减少了检测的样品量,而且鉴定结果直观性好,准确性高。
关键词： 杂交水稻 亲本 SSR引物 PCR 混合DNA 亲缘关系
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番茄褪绿病毒侵染黄瓜的首次报道
《植物保护 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：番茄褪绿病毒Tomato chlorosis virus(ToCV)是严重危害世界经济作物的一种病毒,寄主范围广泛。田间调查发现黄瓜Cucumis sativus表现出叶片黄化、脉间褪绿的疑似番茄褪绿病毒感病症状,同时叶片背面聚集了大量烟粉虱。采用RT-PCR方法对样品叶片和烟粉虱进行检测,ToCV感染率为65%,且发病叶片上烟粉虱携带ToCV。为进一步确定黄瓜是否为番茄褪绿病毒的新寄主,室内利用农杆菌侵染性克隆接种健康黄瓜,结果显示:接种30 d的黄瓜新生叶片出现褪绿症状。采用ToCV HSP70基因的引物对田间黄瓜叶片、烟粉虱和室内黄瓜新生叶片进行RT-PCR,扩增出约450 bp的条带,在NCBI上BLAST显示与KC887999.1的同源性最高,为99%。这些数据表明黄瓜是番茄褪绿病毒的寄主。这是ToCV感染黄瓜的首次报道。
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湖北和广西辣椒脉斑驳病毒的检测及 遗传多样性分析
《南方农业学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：[目的]研究辣椒脉斑驳病毒(Pepper veinal mottle virus,PVMV)的分布及遗传变异,为明确该病毒在我国的流行扩散分子机制提供理论依据.[方法]利用特异性引物反转录PCR(RT-PCR)检测从湖北宜昌及广西南宁和百色采集的48份疑似感染PVMV的辣椒样本;采用常规Sanger测序测定PCR产物序列,序列采用MEGA 5.0构建系统发育进化树,采用RDP等算法分析其可能的重组事件;采用DnaSP v5分析病毒株系不同群体之间的基因流及基因差异.[结果]从48份辣椒样本中检测到5份样本被PVMV侵染,检出率10.42%.基因同源性比对分析结果表明,测定的PVMV湖北和广西分离物CP基因序列同源性在97.00%以上,与其他地区分离物的同源性为91.73%~98.78%.系统发育分析表明,湖北(YC)和广西(NN)PVMV分离物与我国台湾PVMV分离物的亲缘关系最近.重组分析表明,PVMV广西分离物NN10有2个重组事件.[结论]湖北和广西辣椒的PVMV检测结果表明,该病毒已扩散至湖北和广西;基因突变可能是PVMV湖北分离物遗传变异的主要方式之一;而基因重组和基因突变可能是PVMV广西分离物遗传变异的重要因子.
关键词： 辣椒脉斑驳病毒 RT-PCR 系统发育分析 重组 湖北 广西
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番茄斑萎病毒系统侵染我国大蒜
《植物保护 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：番茄斑萎病毒Tomato spotted wilt tospovirus(TSWV)是严重危害世界经济作物的一种病毒,寄主范围广泛。我们在研究中发现番茄斑萎病毒能侵染我国大蒜Allium sativum L.。利用摩擦接种法将TSWV接种到健康大蒜上,结果显示:接种14 d后大蒜新生叶片出现褪绿和白色斑点症状。ELISA检测显示大蒜叶片汁液与TSWV的单克隆抗体产生血清学反应,采用TSWV N基因的引物对大蒜叶片总RNA进行RT-PCR,结果扩增出约800 bp的条带,在NCBI上BLAST显示与TSWV YN5576的同源性最高,为98.52%。这些数据表明番茄斑萎病毒系统侵染我国大蒜。
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重庆辣椒上番茄斑萎病毒的血清学检测及分子鉴定
《园艺学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为明确重庆地区辣椒上番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的发生情况及其外壳蛋白基因(cp)序列变异特征,采用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和反转录PCR(RT-PCR)技术对采自重庆的298份辣椒病毒病样品进行了检测和分子鉴定。Dot-ELISA检测结果表明,有40份辣椒样品检测到TSWV,检出率为13.42%。通过电子显微镜在TSWV检测呈阳性的样品中观察到具包膜的球状病毒粒体。设计扩增TSWV cp的引物,选取6个TSWV阳性样品进行RT-PCR扩增,均扩增到大小约750 bp的目的片段。序列分析表明,重庆辣椒分离物TSWV-CQ(KX611497)与已报道的22个TSWV分离物cp基因的核苷酸相似性为96.1%~99.4%,与已报道的TSWV中国分离物亲缘关系较近,表现出明显的地理相关性。
关键词： 辣椒 番茄斑萎病毒 Dot-ELISA RT-PCR
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薄荷、留兰香特异性引物PCR鉴别方法研究
《中药材 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：目的:筛选留兰香、薄荷鉴别SNP位点,并设计特异性引物,实现薄荷、留兰香及二者混合品的快速鉴别。方法:通过测序及GenBank中下载获得薄荷、留兰香的psbA序列,通过使用Bioedit软件比对获得SNP位点,设计特异性多重PCR引物,通过条件优化,对薄荷、留兰香原植物及药材进行鉴别。结果:构建了多重PCR鉴别体系,能扩增出薄荷181 bp的鉴别条带或(和)留兰香288 bp鉴别条带,通过一个PCR反应就能对药材及二者混合品进行鉴别。结论:使用多重PCR技术可以有效鉴别薄荷、留兰香及二者的混合品。
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湖南省葫芦科作物小西葫芦黄花叶病毒的检测
《湖南农业科学 》 2014
摘要：根据已报道的小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)保守序列设计了一对特异性引物,在58℃下退火30 s,建立了一种可靠、有效的ZYMV普通RT-PCR检测方法。通过该方法成功克隆出一条长度为621 bp的HC-Pro基因片段,并与杭州分离物的ZYMV辅助成分/蛋白酶(HC-Pro)基因核心区域(登录编号为AJ515911.1)的相似度达到99%。采用该方法对湖南省7个地区采集的疑似感病样品进行检测,结果显示:ZYMV平均阳性检出率达54.0%,说明ZYMV是侵染湖南省葫芦科作物的主要病毒之一。
关键词： 小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV) RT-PCR 检测 湖南省
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Taq DNA聚合酶的制备和纯化
《湖南农业科学 》 2013
摘要：Taq DNA聚合酶是分子生物学研究中最常用的热稳定DNA聚合酶之一。试验利用含Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化大肠杆菌E.coli菌株,用异丙基硫代-β-D-乳糖苷(IPTG)诱导表达耐热Taq DNA聚合酶;采用热变性沉淀杂蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测纯度,Bio-Rex 70柱层析纯化蛋白,PCR反应检测Taq DNA聚合酶的浓度和活性。结果表明:分离纯化制备的Taq DNA聚合酶,其纯度、酶活性和酶特异性均达到市售的Taq DNA聚合酶水平。
关键词： Taq DNA聚合酶 Bio-Rex70柱层析 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PCR
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