科研产出
番茄斑萎病毒系统侵染我国大蒜
《植物保护 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：番茄斑萎病毒Tomato spotted wilt tospovirus(TSWV)是严重危害世界经济作物的一种病毒,寄主范围广泛。我们在研究中发现番茄斑萎病毒能侵染我国大蒜Allium sativum L.。利用摩擦接种法将TSWV接种到健康大蒜上,结果显示:接种14 d后大蒜新生叶片出现褪绿和白色斑点症状。ELISA检测显示大蒜叶片汁液与TSWV的单克隆抗体产生血清学反应,采用TSWV N基因的引物对大蒜叶片总RNA进行RT-PCR,结果扩增出约800 bp的条带,在NCBI上BLAST显示与TSWV YN5576的同源性最高,为98.52%。这些数据表明番茄斑萎病毒系统侵染我国大蒜。
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番茄斑萎病毒核衣壳蛋白N及膜多糖蛋白Gn的多克隆抗体制备及应用
《福建农业学报 》 2018 北大核心
摘要：由番茄斑萎病毒Tomato spotted wilt orthotospovirus (TSWV)侵染引起的番茄斑萎病毒病在我国蔬菜、花卉等作物上造成了严重的经济损失。本研究克隆了TSWV核衣蛋白N基因及膜多糖蛋白Gn基因,利用Gateway系统获得N和Gn基因的原核表达载体。将其转化到大肠杆菌表达菌株Rosetta (DE3)细胞内,IPTG诱导表达N蛋白和Gn蛋白,以此为抗原分别免疫新西兰大白兔,制备N蛋白和Gn蛋白的多克隆抗体。Western blot检测结果表明,N蛋白的多克隆抗体能够与N蛋白发生特异性结合反应,间接酶联免疫吸附(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,in-ELISA)分析检测表明抗体滴度为1∶12 800,而Gn蛋白的多克隆抗体特异性差,效价未检出。本研究制备的N蛋白多克隆抗体可用于田间病株的病害诊断,同时有助于开展病毒在介体昆虫内定位、病毒和介体昆虫互作及功能分析的研究。
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重庆辣椒上番茄斑萎病毒的血清学检测及分子鉴定
《园艺学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为明确重庆地区辣椒上番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的发生情况及其外壳蛋白基因(cp)序列变异特征,采用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和反转录PCR(RT-PCR)技术对采自重庆的298份辣椒病毒病样品进行了检测和分子鉴定。Dot-ELISA检测结果表明,有40份辣椒样品检测到TSWV,检出率为13.42%。通过电子显微镜在TSWV检测呈阳性的样品中观察到具包膜的球状病毒粒体。设计扩增TSWV cp的引物,选取6个TSWV阳性样品进行RT-PCR扩增,均扩增到大小约750 bp的目的片段。序列分析表明,重庆辣椒分离物TSWV-CQ(KX611497)与已报道的22个TSWV分离物cp基因的核苷酸相似性为96.1%~99.4%,与已报道的TSWV中国分离物亲缘关系较近,表现出明显的地理相关性。
关键词： 辣椒 番茄斑萎病毒 Dot-ELISA RT-PCR
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番茄斑萎病毒YN-1株系G_N/G_C基因的克隆与分析
《植物保护 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：作者以TSWV YN-1株系为研究材料,克隆了其GN/GC基因,测序后与GenBank中TSWV其他株系GN/GC基因进行比对,结果显示:YN-1GN/GC基因全长3 408bp,编码1 135个氨基酸,构建的系统发育树可分为4个群,YN-1属于群Ⅱ,与源自西班牙的SPAIN-2株系的GN/GC基因核苷酸相似性最高,达98.88%,氨基酸相似性达98.85%。YN-1株系N基因和GN/GC基因的起源不同,我们推断YN-1可能是一个发生重排(reassortment)的新株系,是不同地理起源的株系在共同传播过程中发生了重排的结果,具体原因有待进一步研究。
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