科研产出
利用PCR产物确定杂交水稻品种与亲本间的亲缘关系
《杂交水稻 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：以杂种F_1代两优336、德两优华占及两优336的母本C815S及父本R336为材料,利用中华人民共和国农业行业标准(NY/T 1433—2014)水稻品种真实性鉴定所采用的48对SSR引物进行PCR扩增,确定杂交水稻品种与双亲之间的亲缘关系。结果表明,利用双亲混合DNA与杂种F_1样品DNA的PCR扩增产物进行比较,可以鉴定出杂交水稻品种与双亲之间的亲缘关系。该方法不仅减少了检测的样品量,而且鉴定结果直观性好,准确性高。
关键词： 杂交水稻 亲本 SSR引物 PCR 混合DNA 亲缘关系
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番茄褪绿病毒侵染黄瓜的首次报道
《植物保护 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：番茄褪绿病毒Tomato chlorosis virus(ToCV)是严重危害世界经济作物的一种病毒,寄主范围广泛。田间调查发现黄瓜Cucumis sativus表现出叶片黄化、脉间褪绿的疑似番茄褪绿病毒感病症状,同时叶片背面聚集了大量烟粉虱。采用RT-PCR方法对样品叶片和烟粉虱进行检测,ToCV感染率为65%,且发病叶片上烟粉虱携带ToCV。为进一步确定黄瓜是否为番茄褪绿病毒的新寄主,室内利用农杆菌侵染性克隆接种健康黄瓜,结果显示:接种30 d的黄瓜新生叶片出现褪绿症状。采用ToCV HSP70基因的引物对田间黄瓜叶片、烟粉虱和室内黄瓜新生叶片进行RT-PCR,扩增出约450 bp的条带,在NCBI上BLAST显示与KC887999.1的同源性最高,为99%。这些数据表明黄瓜是番茄褪绿病毒的寄主。这是ToCV感染黄瓜的首次报道。
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湖北和广西辣椒脉斑驳病毒的检测及 遗传多样性分析
《南方农业学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：[目的]研究辣椒脉斑驳病毒(Pepper veinal mottle virus,PVMV)的分布及遗传变异,为明确该病毒在我国的流行扩散分子机制提供理论依据.[方法]利用特异性引物反转录PCR(RT-PCR)检测从湖北宜昌及广西南宁和百色采集的48份疑似感染PVMV的辣椒样本;采用常规Sanger测序测定PCR产物序列,序列采用MEGA 5.0构建系统发育进化树,采用RDP等算法分析其可能的重组事件;采用DnaSP v5分析病毒株系不同群体之间的基因流及基因差异.[结果]从48份辣椒样本中检测到5份样本被PVMV侵染,检出率10.42%.基因同源性比对分析结果表明,测定的PVMV湖北和广西分离物CP基因序列同源性在97.00%以上,与其他地区分离物的同源性为91.73%~98.78%.系统发育分析表明,湖北(YC)和广西(NN)PVMV分离物与我国台湾PVMV分离物的亲缘关系最近.重组分析表明,PVMV广西分离物NN10有2个重组事件.[结论]湖北和广西辣椒的PVMV检测结果表明,该病毒已扩散至湖北和广西;基因突变可能是PVMV湖北分离物遗传变异的主要方式之一;而基因重组和基因突变可能是PVMV广西分离物遗传变异的重要因子.
关键词： 辣椒脉斑驳病毒 RT-PCR 系统发育分析 重组 湖北 广西
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番茄斑萎病毒系统侵染我国大蒜
《植物保护 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：番茄斑萎病毒Tomato spotted wilt tospovirus(TSWV)是严重危害世界经济作物的一种病毒,寄主范围广泛。我们在研究中发现番茄斑萎病毒能侵染我国大蒜Allium sativum L.。利用摩擦接种法将TSWV接种到健康大蒜上,结果显示:接种14 d后大蒜新生叶片出现褪绿和白色斑点症状。ELISA检测显示大蒜叶片汁液与TSWV的单克隆抗体产生血清学反应,采用TSWV N基因的引物对大蒜叶片总RNA进行RT-PCR,结果扩增出约800 bp的条带,在NCBI上BLAST显示与TSWV YN5576的同源性最高,为98.52%。这些数据表明番茄斑萎病毒系统侵染我国大蒜。
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重庆辣椒上番茄斑萎病毒的血清学检测及分子鉴定
《园艺学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为明确重庆地区辣椒上番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的发生情况及其外壳蛋白基因(cp)序列变异特征,采用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和反转录PCR(RT-PCR)技术对采自重庆的298份辣椒病毒病样品进行了检测和分子鉴定。Dot-ELISA检测结果表明,有40份辣椒样品检测到TSWV,检出率为13.42%。通过电子显微镜在TSWV检测呈阳性的样品中观察到具包膜的球状病毒粒体。设计扩增TSWV cp的引物,选取6个TSWV阳性样品进行RT-PCR扩增,均扩增到大小约750 bp的目的片段。序列分析表明,重庆辣椒分离物TSWV-CQ(KX611497)与已报道的22个TSWV分离物cp基因的核苷酸相似性为96.1%~99.4%,与已报道的TSWV中国分离物亲缘关系较近,表现出明显的地理相关性。
关键词： 辣椒 番茄斑萎病毒 Dot-ELISA RT-PCR
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薄荷、留兰香特异性引物PCR鉴别方法研究
《中药材 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：目的:筛选留兰香、薄荷鉴别SNP位点,并设计特异性引物,实现薄荷、留兰香及二者混合品的快速鉴别。方法:通过测序及GenBank中下载获得薄荷、留兰香的psbA序列,通过使用Bioedit软件比对获得SNP位点,设计特异性多重PCR引物,通过条件优化,对薄荷、留兰香原植物及药材进行鉴别。结果:构建了多重PCR鉴别体系,能扩增出薄荷181 bp的鉴别条带或(和)留兰香288 bp鉴别条带,通过一个PCR反应就能对药材及二者混合品进行鉴别。结论:使用多重PCR技术可以有效鉴别薄荷、留兰香及二者的混合品。
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湖南省葫芦科作物小西葫芦黄花叶病毒的检测
《湖南农业科学 》 2014
摘要：根据已报道的小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)保守序列设计了一对特异性引物,在58℃下退火30 s,建立了一种可靠、有效的ZYMV普通RT-PCR检测方法。通过该方法成功克隆出一条长度为621 bp的HC-Pro基因片段,并与杭州分离物的ZYMV辅助成分/蛋白酶(HC-Pro)基因核心区域(登录编号为AJ515911.1)的相似度达到99%。采用该方法对湖南省7个地区采集的疑似感病样品进行检测,结果显示:ZYMV平均阳性检出率达54.0%,说明ZYMV是侵染湖南省葫芦科作物的主要病毒之一。
关键词： 小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV) RT-PCR 检测 湖南省
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Taq DNA聚合酶的制备和纯化
《湖南农业科学 》 2013
摘要：Taq DNA聚合酶是分子生物学研究中最常用的热稳定DNA聚合酶之一。试验利用含Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化大肠杆菌E.coli菌株,用异丙基硫代-β-D-乳糖苷(IPTG)诱导表达耐热Taq DNA聚合酶;采用热变性沉淀杂蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测纯度,Bio-Rex 70柱层析纯化蛋白,PCR反应检测Taq DNA聚合酶的浓度和活性。结果表明:分离纯化制备的Taq DNA聚合酶,其纯度、酶活性和酶特异性均达到市售的Taq DNA聚合酶水平。
关键词： Taq DNA聚合酶 Bio-Rex70柱层析 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PCR
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2011年湖南省水稻矮缩病病原的RT-PCR检测和病害分级
《湖南农业科学 》 2013
摘要：为明确湖南省水稻矮缩病的毒源种类,从湘北常德、湘中长沙和湘南永州三地采集中晚稻水稻秧苗、植株、稻谷等样品,并对其进行了毒源的RT-PCR检测。结果表明:湖南省水稻矮缩病毒源为南方水稻黑条矮缩病毒,所检测样品中没有齿叶矮缩病毒和水稻黑条矮缩病毒。2011年采集的所有水稻秧苗、植株和稻谷样品中南方水稻黑条矮缩病毒检出样品数占有病害症状样品数的23.73%。可以把样品是否具有蜡泪,作为判断南方水稻黑条矮缩病的1个典型症状。其病害危害程度可分为0～4级。
关键词： 南方水稻黑条矮缩病毒 RT-PCR检测 蜡泪症状 病害分级标准
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水稻缺素胁迫下实时荧光定量RT-PCR的内参基因的选择
《农业生物技术学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：营养元素的吸收和利用是影响水稻产量的重要决定因素。利用qRT-PCR进行缺素胁迫下水稻功能基因的表达分析时,应当筛选适合于缺素胁迫下qRT-PCR分析的内参基因。本研究以缺乏氮、磷、钾、钙、镁、硫6种大量元素1周和2周的水稻(Oryza sativa L.ssp.japonica)幼苗组成的缺素样品池为材料,选取12个水稻管家基因作为缺素条件下qRT-PCR的候选内参基因,利用geNorm软件分析缺素条件下各基因总体表达的稳定性并筛选出适合于缺素处理下qRT-PCR分析的内参基因eIF4a,确定用于缺素条件下内参校正的最佳基因数量组合为2个。根据比较分析多种内参基因组合在不同缺素处理下的实际校正结果,证明内参基因的最佳组合对于缺素条件下qRT-PCR分析的重要性以及校正结果的有效性。最后,验证了eIF4a单基因校正的可行性与有效性,为geNorm软件提供了有益的改进和补充,这为水稻缺素胁迫下qRT-PCR分析的提供了参考和借鉴。
关键词： 荧光定量RT-PCR 内参基因 水稻 缺素 geNorm
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