科研产出
灰毡毛忍冬内参基因筛选和Mads-box家族基因AGL15的时空表达分析
《中草药 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：目的筛选灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides基因表达分析的内参基因,研究其Mads-box基因家族AGL15基因(Lm AGL15)的时空表达特性。方法克隆灰毡毛忍冬内参基因18 S r RNA、Ubiquilin、Actin和Efl-β的基因片段,评价了4个基因在不同部位叶、茎和花蕾,以及4个基因在灰毡毛忍冬生长不同时期的稳定性,筛选内参基因,分析Lm AGL15基因的时空表达特性。结果 18 S r RNA表达最稳定,适宜作为内参基因,叶片、茎的Lm AGL15基因相对表达量较低,花蕾相对表达量较高。花蕾不同发育时期,Lm AGL15的相对表达量呈现逐渐降低的变化,20 d后Lm AGL15的相对表达量最低,然后依次是花蕾初期(15 d)、青绿色花蕾期(10 d)、绿白色花蕾期(5 d)。结论 18 S r RNA是适宜的内参基因。叶片、茎和花蕾中,Lm AGL15的相对表达量差异明显。花蕾发育不同时期,Lm AGL15的相对表达量呈逐渐降低的变化,与花蕾开放变化规律相似。
关键词： 灰毡毛忍冬 内参基因 蕾期延长 时空表达特性 18 S r RNA Ubiquilin Actin Efl-β AGL15
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水稻缺素胁迫下实时荧光定量RT-PCR的内参基因的选择
《农业生物技术学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：营养元素的吸收和利用是影响水稻产量的重要决定因素。利用qRT-PCR进行缺素胁迫下水稻功能基因的表达分析时,应当筛选适合于缺素胁迫下qRT-PCR分析的内参基因。本研究以缺乏氮、磷、钾、钙、镁、硫6种大量元素1周和2周的水稻(Oryza sativa L.ssp.japonica)幼苗组成的缺素样品池为材料,选取12个水稻管家基因作为缺素条件下qRT-PCR的候选内参基因,利用geNorm软件分析缺素条件下各基因总体表达的稳定性并筛选出适合于缺素处理下qRT-PCR分析的内参基因eIF4a,确定用于缺素条件下内参校正的最佳基因数量组合为2个。根据比较分析多种内参基因组合在不同缺素处理下的实际校正结果,证明内参基因的最佳组合对于缺素条件下qRT-PCR分析的重要性以及校正结果的有效性。最后,验证了eIF4a单基因校正的可行性与有效性,为geNorm软件提供了有益的改进和补充,这为水稻缺素胁迫下qRT-PCR分析的提供了参考和借鉴。
关键词： 荧光定量RT-PCR 内参基因 水稻 缺素 geNorm
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Bt毒素诱导下小菜蛾实时定量PCR内参基因的筛选
《昆虫学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：【目的】筛选出Bt毒素诱导后的小菜蛾Plutella xylostella(L.)的实时定量PCR最适内参基因。【方法】选取核糖体18S rRNA(18S rRNA)、肌动蛋白(ACTB)、延伸因子(EF1)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、核糖体蛋白L32(RPL32)、核糖体蛋白S13(RPS13)、核糖体蛋白S20(RPS20)和β-微管蛋白(TUB)基因作为候选内参基因,以geNorm、Normfinder和BestKeeper软件分析这8个基因在Bt毒素诱导后的小菜蛾不同品系中肠组织中的表达稳定性。并应用筛选出来的内参基因分析小菜蛾氨肽酶2(aminopeptidase N2,APN2)基因的表达水平。【结果】geNorm软件以RPS13和EF1为最稳定内参基因,NormFinder和BestKeeper软件均以RPS13和RPL32为最稳定基因。使用3种不同内参基因分析Bt毒素诱导后的小菜蛾Bt抗性和敏感品系中ANP2表达水平时,新的内参基因EF1和传统内参基因RPL32表现了良好的稳定性,二者作为标准化因子,ANP2表达量结果基本一致,而使用18S rRNA作为内参基因,却导致部分表达量分析结果有所误差。【结论】筛选出PRS13,RPL32和EF1可以作为小菜蛾某些试验条件下的内参基因,对小菜蛾基因表达研究奠定了一定基础,也对其他昆虫内参基因的筛选具有参考价值。
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