科研产出
华南生态型黄瓜'CU2'遗传转化体系的优化
《辣椒杂志 》 2024
摘要：黄瓜是一种具有重要经济和生物价值的蔬菜作物.基因组编辑技术的广泛应用推动了黄瓜育种改良和基因组功能表征研究的快速发展.目前华南生态型黄瓜品种仍缺乏具有普遍适用性农杆菌介导的遗传转化体系,这限制了基因组编辑技术的高效应用.本研究以华南生态型黄瓜品种'CU2'为材料,CsMATL基因编辑转基因株创制为例,进行遗传转化体系各种因素的优化,实现了该黄瓜品种外植体再分化芽的最高遗传转化率.研究结果表明选用SGM培养基,添加2 mg/L 6-BA、1 mg/L ABA后进行播种,在200 μmol/L AS浓度下侵染外植体,共培养后采用摇床以及两次200 mg/L TMT溶液和三次无菌水清洗脱菌,之后在含有100 mg/L Kan、2 mg/L 6-BA、1 mg/L ABA的分化培养基中进行分化培养,利用上述优化方案可将'CU2'的遗传转化率提高至 3.19%.该研究为华南生态型黄瓜遗传转化体系的优化和功能基因操作奠定了理论基础.
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大豆GmSDG25基因的克隆及拟南芥遗传转化
《分子植物育种 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：GmSDG25是拟南芥组蛋白赖氨酸甲基转移酶基因SDG25在大豆中的同源基因，为探究该基因的功能，本研究从栽培大豆品种‘湘春2701’中克隆到2个GmSDG25基因，分别命名为GmSDG25a和GmSDG25b，两者的全长cDNA长度分别是3 684和3 681 bp。通过构建过表达载体pFGC5941-35S::GmSDG25a/GmSDG25b，将其分别转化至拟南芥sdg25突变体中，对获得的T3代纯合转基因拟南芥植株进行表型鉴定和分子检测，发现该转基因植株sdg25-35S::GmSDG25a和sdg25-35S::GmSDG25b的开花时间均表现出晚于sdg25突变体，接近于野生型（Col）开花的表型；并且植株内与开花调控相关的FLC、FT、SOC1基因的表达量较之Col无明显差异，说明GmSDG25a和GmSDG25b基因在拟南芥sdg25突变体中异位表达，能够互补sdg25的早花表型，使其恢复至Col的开花表型，表明GmSDG25a和GmSDG25b基因可能具有与拟南芥SDG25相似的调控植物开花的生物学功能。研究结果将为后续揭示GmSDG25基因参与大豆开花时间调控的作用机制提供理论参考。
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转Cry1Ab基因水稻恢复系KR1128的鉴定及组合评价
《杂交水稻 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：螟虫是危害水稻生产的重要虫害，长江中下游稻区尤以二化螟发病较多，对水稻稳产、增产造成较大影响。研究以转Cry1Ab基因抗虫恢复系mfb-MH86为供体，强优恢复系HR1128为受体，通过田间回交转育，结合分子标记检测、农艺性状筛选得到抗虫恢复系新材料KR1128-1、KR1128-2和KR1128-3。产量性状分析结果表明，改良恢复系与非转基因对照HR1128相比，株高显著降低，但单株有效穗数有所改善，均显著高于HR1128；改良恢复系的结实率均略高于亲本HR1128，以KR1128-3的结实率最高（82.0%）。在稻米品质上，改良新株系与HR1128多数指标无显著差异，少数性状稍有改善，如KR1128-3在整精米率、垩白面积和垩白度上均显著优于HR1128。酶联免疫吸附试验显示，改良恢复系均能够稳定表达Bt蛋白，以茎秆中抗虫蛋白含量最高、穗部籽粒中最少；室内螟虫抗性鉴定结果证明，所有改良系的抗虫性均大幅提升，达到高抗水平。测配结果表明，两系杂交稻抗虫组合整体表现好于三系杂交稻组合，其中恢复系KR1128-3与Y58S、丰源A和炳1A所配组合的产量均高于其他转基因组合和HR1128与各不育系所配组合，丰产性较好。研究为选育适应长江中下游稻区的高产抗虫转基因水稻新组合储备了种质资源。
关键词： 水稻 恢复系 杂交组合 螟虫 转基因 Cry1Ab 抗虫蛋白
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Amy32B启动子在水稻中的表达分析
《杂交水稻 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：根据已报道的在大麦糊粉层特异表达的α-淀粉酶基因Amy32B,利用序列合成技术将Amy32B启动子与红色荧光蛋白基因RFP融合在一起,构建植物表达载体,并由农杆菌介导法导入水稻品种明恢86中,对转基因水稻植株中的红色荧光蛋白RFP活性进行检测.结果表明,Amy32B启动子在水稻中同样具有活性,在糊粉层背部特异表达,在整个植株中也有微弱本底表达.这表明Amy32B启动子为外源基因在转基因水稻糊粉层中高表达提供了新的工具,也为研究基因工程改良水稻提供了新的参考.
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转mapk双链RNA表达载体黄瓜对土壤线虫多样性的影响
《中国蔬菜 》 2019 北大核心
摘要：为了评价转mapk双链RNA表达载体黄瓜的生物安全性,明确其对根际土壤线虫多样性的影响,采用18S rDNA基因克隆文库方法对转mapk双链RNA表达载体黄瓜和非转基因黄瓜根际土壤线虫多样性进行研究。结果表明,转基因黄瓜和非转基因黄瓜根际土壤线虫均以食细菌线虫为主,其中小杆线虫属、头叶线虫属、拟丽突线虫属为优势属。转基因和非转基因黄瓜根际土壤线虫多样指数和生态指数无显著差异,表明转mapk双链RNA表达载体基因黄瓜对土壤线虫群落多样性无显著影响,具有较高的生物安全性。
关键词： 促分裂原活化蛋白激酶 土壤线虫 18S rDNA 黄瓜 转基因 生物安全性
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辣椒胶孢炭疽菌遗传转化体系的建立
《植物保护 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：由辣椒胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides导致的辣椒炭疽病是辣椒生产上最为严重的真菌病害之一。本文以辣椒胶孢炭疽菌CSLL11为供试菌株,采用PEG-CaCl_2介导的原生质体转化法,将含有潮霉素B抗性基因和eGFP表达基因的DNA片段成功转入辣椒胶孢炭疽菌的原生质体中,获得了稳定表达绿色荧光的转化子,从而成功建立了辣椒胶孢炭疽菌的遗传转化体系。试验结果表明,可有效筛选阳性转化子的潮霉素B浓度为500 mg/L;PCR及Southern blot结果显示,eGFP表达基因已单拷贝整合至辣椒胶孢炭疽菌转化子的基因组中;使用荧光显微镜观察第一代及继代培养后的转化子,菌丝与分生孢子均表现出强烈的绿色荧光信号,说明GFP能在转化子中稳定遗传;将转化子与野生型菌株相比,菌落形态、生长速率及致病力水平无明显差异。本研究建立了辣椒胶孢炭疽菌遗传转化体系并获得了稳定表达绿色荧光蛋白的转化子,对辣椒炭疽菌与寄主互作的研究及病害防治具有重要意义。
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ACC氧化酶反义基因转化‘翠玉’猕猴桃
《分子植物育种 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为建立‘翠玉’猕猴桃基因功能研究技术平台并通过生物技术改良‘翠玉’猕猴桃,本研究以‘翠玉’猕猴桃叶片为实验材料,利用农杆菌介导法将ACC氧化酶(ACO)基因的反义链导入‘翠玉’猕猴桃,共获得14株潮霉素抗性植株。PCR鉴定结果显示,其中8株扩增获得了目的条带,初步统计阳性植株约为57.1%。随机挑选其中4株进行实时荧光定量PCR检测,结果表明,ACO基因的相对表达量是野生型植株的22%～41%。本研究为利用分子生物学手段改良‘翠玉’猕猴桃品种提供了工作基础。
关键词： 翠玉猕猴桃 反义RNA技术 农杆菌 组织培养 遗传转化
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干旱胁迫下转PEPC+PPDK基因增强水稻光合机构的保护能力
《分子植物育种 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：随着全球的经济发展和人口膨胀,水资源短缺现象日趋严重,干旱已成为粮食生产的主要限制因素之一。C_4植物(如玉米)具有较高的光合速率以及较高的水分利用效率,利用转基因技术将C_4植物高光合及耐旱特征引入C_3作物(如水稻),被认为是解决水资源短缺与全球粮食需求不断增长矛盾的重要手段。本研究以转PEPC+PPDK双基因水稻及其非转基因对照为材料,通过PEG6000模拟干旱条件,研究干旱胁迫下叶片叶绿素含量、叶绿素荧光参数、C_4光合酶活性、叶片抗氧化酶活性等光合生理相关参数变化。结果表明:干旱胁迫下转PEPC+PPDK基因水稻叶绿素含量、C_4光合酶活性、抗氧化能力等均有提升;干旱胁迫对转PEPC+PPDK基因水稻PSⅡ的光化学活性抑制较小,对细胞的损伤相对更低,表明转基因水稻对光合机构的保护能力明显增强。
关键词： 水稻 磷酸烯醇丙酮酸羧化酶 转基因 干旱胁迫
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利用qPCR法检测OsPIMT1转基因水稻中的外源片段拷贝数
《福建稻麦科技 》 2017
摘要：水稻转化过程中,多个拷贝数整合到基因组中影响遗传稳定性和基因表达。传统的Southern杂交检测法鉴定费时费力,不适合目前高通量和自动化的检测要求。因此研究通过比较定量除草剂草铵膦抗性基因(bar)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH2,建立了基于实时荧光定量PCR的拷贝数检测法。利用此体系对9个独立的异天冬氨酸甲基转移酶OsPIMT1转基因T0代植株进行了荧光定量分析,其中6个为单拷贝,3个为双拷贝,经过Southern杂交和分离比分析验证,表明该方法能够快速,准确的鉴定水稻含有草铵膦抗性基因的水稻转基因植株。
关键词： 水稻 转基因 草铵膦抗性基因(bar) 甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH2 实时定量PCR 拷贝数
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