科研产出
‘甜蜜蓝宝石’葡萄组培技术研究
《中国果菜 》 2023
摘要：以鲜食葡萄品种‘甜蜜蓝宝石’为试材，取当年生的半木质化茎段作为组织培养的外植体，通过探索外植体消毒、启动培养、增殖培养、生根培养以及炼苗移栽环节的关键技术，建立适用于‘甜蜜蓝宝石’的组培快繁体系。结果表明，将当年生半木质化茎段，先用75%酒精消毒40 s、再用0.1%升汞消毒15 min，外植体成活率达到40%；最佳启动培养基为1/2 MS+30 g/L蔗糖+6.5 g/L琼脂，腋芽萌发率达到57.8%；利用1/2 MS培养基作为继代培养基，增殖效果最好，45 d增殖系数高达5.2；利用1/4 MS+IBA 0.1 mg/L培养基进行生根培养效果最好，生根率达到88.3%，新芽茎秆较为粗壮，生长正常；生根培养50 d以上，按程序炼苗过渡移栽，成活率高达90%。
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60Co γ辐射对两种栀子组织培养的影响
《辐射研究与辐射工艺学报 》 2021 CSCD
摘要：探讨60Co γ辐射对药用栀子种子组织培养的诱变效应。以"林海1号"、武冈野生栀子果实为试材,采用4个剂量的60Co γ射线辐照处理,处理后取种子进行组织培养。观察不同辐射条件下两种栀子组织培养出愈率、死亡率、不定芽分化、不定根分化情况,以及组培苗叶片结构的变化。随着吸收剂量的增加,"林海1号"出愈率降低,而武冈野生栀子40 Gy处理的出愈率升高;辐照后两种栀子不定芽分化率、生根率均呈下降趋势;"林海1号"半致死剂量范围为40～60 Gy;武冈野生栀子半致死剂量约为40 Gy。经过辐照处理的两种栀子叶片气孔都发生了不同程度的变化,保卫细胞出现皱缩现象,两种栀子均以40 Gy处理最为明显。20～40 Gy 60Co γ射线辐照处理后,"林海1号"栀子、武冈野生栀子均能出苗且正常生长,生根率较高,是较为合适的剂量范围。
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ACC氧化酶反义基因转化‘翠玉’猕猴桃
《分子植物育种 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为建立‘翠玉’猕猴桃基因功能研究技术平台并通过生物技术改良‘翠玉’猕猴桃,本研究以‘翠玉’猕猴桃叶片为实验材料,利用农杆菌介导法将ACC氧化酶(ACO)基因的反义链导入‘翠玉’猕猴桃,共获得14株潮霉素抗性植株。PCR鉴定结果显示,其中8株扩增获得了目的条带,初步统计阳性植株约为57.1%。随机挑选其中4株进行实时荧光定量PCR检测,结果表明,ACO基因的相对表达量是野生型植株的22%～41%。本研究为利用分子生物学手段改良‘翠玉’猕猴桃品种提供了工作基础。
关键词： 翠玉猕猴桃 反义RNA技术 农杆菌 组织培养 遗传转化
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虾脊兰原球茎诱导及植株高效再生体系研究
《江苏农业科学 》 2019
摘要：以野生虾脊兰(Calanthe discolor)未成熟蒴果为材料,MS为基本培养基,探讨不同光照度、热激和不同培养基配方对虾脊兰种子萌发、原球茎发生及植株再生的影响。结果表明,未完全成熟的种子在1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+20 g/L马铃薯+1.0 g/L活性炭培养基中萌芽率最佳;在1 500 lx光照度条件下培养时种子萌发速率较快。通过黑暗条件下35℃热激5 d有利于已萌动种子脱分化形成原球茎。使用MS+3.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖培养基诱导原球茎形成胚性愈伤组织效果最好。MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+20 g/L马铃薯培养基分化形成植株分化率最高,1/2MS+0.2 mg/L IBA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+0.1 g/L活性炭培养基则为最佳生根培养基,生根率100%,植株根系发达,长势健壮。该研究建立了虾脊兰无菌快繁体系,为保护野生虾脊兰资源和种苗人工繁育提供了有效技术途径,也为其遗传转化研究奠定基础。
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美洲矾根愈伤组织诱导及其快繁技术体系研究
《湖北农业科学 》 2017
摘要：以矾根(Heuchera micrantha)植株不同器官为外植体材料,MS培养基为基本培养基,探索了矾根组织培养与快繁技术体系。结果表明,选取幼芽作为外植体时快繁效率最高,最适芽诱导培养基配方为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,采用4/5MS+0.2 mg/LNAA的生根培养方案较为适宜。
关键词： 矾根(Heuchera micrantha) 组织培养 愈伤组织 快繁
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四倍体稗草的组织培养与快速繁殖
《激光生物学报 》 2017
摘要：以筛选得到的四倍体稗草成熟胚作为外植体,进行了组织培养与快速繁殖技术的研究。结果表明:最佳外植体消毒方式为70%乙醇浸泡30 s+0.1%(w/v)的升汞消毒15 min。最佳诱导培养基为MS盐、DL维生素+2.5 mg/L 2,4-D+300 mg/L谷氨酰胺+500 mg/L脯氨酸+3%麦芽糖。将愈伤组织转入分化培养基(MS+50 mg/L肌醇+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L KT+0.5 mg/L NAA+0.25 mg/L IAA+3%麦芽糖)上,培养20 d后超过70%的愈伤组织分化成苗。将3-5 cm长的分化苗转入1/2 MS生根培养基进行生根培养。炼苗后,移入营养土与珍珠岩(2∶1)的基质中,移栽成活率高达90%以上。该体系的建立为稗草抗除草剂基因的功能验证提供了前提条件。
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籼稻胚性愈伤组织继代培养基体系优化及愈伤组织褐化原因剖析
《农业生物技术学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：农杆菌(Agrobactrium tumefaciens)介导的转化技术已广泛应用于粳稻品种(Oryza sativa ssp.japonica)中,但迄今未能找到适合于籼稻品种(O.sativa ssp.indica)高效遗传转化的农杆菌介导转化体系,籼稻品种的愈伤组织在继代过程中的严重褐化是最主要的制约因素之一。本研究以籼稻品种93-11为材料,通过响应面设计分析方法,进行二次多项式回归拟合,预测数学模型,研究2,4-二氯苯氧基乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D)浓度、N6-呋喃甲基腺嘌呤(kinetin,KT)浓度和碳源中蔗糖和麦芽糖的比例对籼稻品种愈伤组织诱导的影响,确定了最适宜93-11成熟胚诱导愈伤组织的培养基成分:以MS为基本培养基,添加2.92 mg/L 2,4-D、0.59 mg/L KT、16.37 g/L蔗糖和13.63 g/L麦芽糖;并以此优化培养基继代籼稻愈伤组织。为了研究93-11愈伤褐化的原因,采用组织学与解剖学方法,观察93-11正常愈伤组织和褐化愈伤组织。结果表明,两者的表观结构存在较大差异,正常愈伤组织表面粗糙,凹凸不平;褐化愈伤组织表面结构看似光滑,但是放大后发现这种平滑结构是由于所有细胞失去规则圆形变为无活性扁平状,且细胞不易成团,细胞之间空隙小而少形成的。用q RT-PCR技术分析了褐化相关基因在褐化愈伤组织中的表达情况,发现切伤后与褐化相关的基因生长素输入载体1基因(auxin1,AUX1)和蔗糖非依赖1蛋白激酶2基因(sucrose non-fermenting 1-related nrotein kinase 2,Sn RK2)的表达量虽然都比较低,但是在93-11成熟胚诱导的正常愈伤组织和褐化愈伤组织中存在明显差异,而酚类物质氧化途径中与酚类物质合成的基因苯丙氨酸解氨酶基因(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)和多酚氧化酶基因(polyphenol oxidase,PPO)在正常愈伤组织还是褐化愈伤组织中都没有检测到表达量。发现组织培养切伤是愈伤组织褐化的主要原因,为进一步阐明愈伤组织的褐化机理提供参考。
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