科研产出
水稻铜/锌超氧化物歧化酶铜伴侣基因克隆与表达分析
《基因组学与应用生物学 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：本研究对水稻铜/锌超氧化物歧化酶铜伴侣(OsCCS)的基本特征、分布情况及功能做了初步探究。通过同源蛋白序列比对,发现OsCCS在多个物种中保守存在。通过芯片分析,结果表明OsCCS热胁迫后表达上调,且OsCCS在各组织中表达有差异,其中在叶中的表达量高,在茎、穗中表达量低。通过实时定量PCR对芯片结果进行验证,发现与芯片结果一致。构建了pCAMBIA2300-OsCCS-GFP载体,通过转化烟草瞬时表达,发现OsCCS蛋白定位于细胞核。上述研究为深入了解OsCCS在水稻中的生物学功能提供了基础。
关键词： 铜锌超氧化物歧化酶铜伴侣 瞬时表达 热胁迫 实时定量PCR
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利用qPCR法检测OsPIMT1转基因水稻中的外源片段拷贝数
《福建稻麦科技 》 2017
摘要：水稻转化过程中,多个拷贝数整合到基因组中影响遗传稳定性和基因表达。传统的Southern杂交检测法鉴定费时费力,不适合目前高通量和自动化的检测要求。因此研究通过比较定量除草剂草铵膦抗性基因(bar)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH2,建立了基于实时荧光定量PCR的拷贝数检测法。利用此体系对9个独立的异天冬氨酸甲基转移酶OsPIMT1转基因T0代植株进行了荧光定量分析,其中6个为单拷贝,3个为双拷贝,经过Southern杂交和分离比分析验证,表明该方法能够快速,准确的鉴定水稻含有草铵膦抗性基因的水稻转基因植株。
关键词： 水稻 转基因 草铵膦抗性基因(bar) 甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH2 实时定量PCR 拷贝数
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普通油茶两个Δ-12脂肪酸脱氢酶基因序列特征及表达模式研究
《林业科学研究 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：[目地]研究普通油茶油脂成分形成的调控机制。[方法]通过转录组测序获得2条普通油茶Δ-12脂肪酸脱氢酶基因序列,分别命名为Cofad6和Cofad2-2,并对这两个基因及其编码蛋白的序列特征进行比较,对其基因表达量与脂肪酸成分含量的相关性进行分析。[结果]Cofad6基因c DNA编码区全长1 347 bp,编码448个氨基酸;Cofad2-2基因c DNA编码区全长1 152 bp,编码383个氨基酸。经比对,Co FAD6蛋白与其余物种FAD6蛋白有65.7%83.68%的氨基酸同源,Co FAD2-2与浙江红花油茶FAD2-2蛋白有99.22%的氨基酸同源,与其余物种的蛋白质78.59%81.72%同源。蛋白质二级结构分析表明,Co FAD6和Co FAD2-2均具有一个脂肪酸去饱和酶结构域,属于脂酰-Co A去饱和酶基因家族;两者均为跨膜蛋白,且Co FAD2-2具有定位于内质网的保守模序。定量PCR检测发现,在普通油茶‘长林4号’无性系未成熟种子中,Cofad6表达量随着种子发育先升高后降低,而Cofad2-2基因随着种子发育表达量逐渐降低,与种子油脂中亚油酸、亚麻酸含量变化趋势呈显著正相关,与油酸含量变化呈显著负相关。[结论]推测Cofad2-2基因是调控普通油茶种子油脂中油酸和亚油酸含量的关键基因之一,该研究为普通油茶油脂改良基因工程育种奠定了基础。
关键词： 普通油茶 Δ-12脂肪酸脱氢酶基因 表达模式 实时定量PCR
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RNAi介导的棉铃虫细胞色素P450酶系几种组分基因沉默对高效氯氰菊酯毒力的影响(英文)
《植物保护学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为进一步明确细胞色素P450 CYP6B7、细胞色素b5(cytochrome b5,Cyt-b5)和细胞色素P450还原酶(cytochrome P450 reductase,CPR)在棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)对拟除虫菊酯类药剂抗性中的作用,通过RNA干扰技术沉默了抗氰戊菊酯棉铃虫中3种组分的基因,并测定基因沉默后高效氯氰菊酯对棉铃虫的毒力变化。结果显示,经单个CYP6B7或CYP6B7与CPR、Cyt-b5基因的双链RNA注射处理后12~48 h,棉铃虫幼虫死亡率在19.4%~92.5%之间,明显高于空白对照处理的10.47%~62.87%;高效氯氰菊酯对基因沉默后幼虫的LD50值随着时间的延长而逐渐下降,12~48 h的LD50值在0.97~2.97μg/头之间,而空白对照处理为2.27~3.57μg/头。研究表明,细胞色素P450 CYP6B7,或CYP6B7与CPR、Cyt-b5基因的沉默,可提高高效氯氰菊酯对抗性棉铃虫的毒力,进一步证明了CYP6B7、CPR和Cyt-b5在棉铃虫对菊酯类药剂抗性中起着重要作用。
关键词： 棉铃虫 细胞色素P450酶系 RNA干扰 抗药性 实时定量PCR
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Bt毒素诱导下小菜蛾实时定量PCR内参基因的筛选
《昆虫学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：【目的】筛选出Bt毒素诱导后的小菜蛾Plutella xylostella(L.)的实时定量PCR最适内参基因。【方法】选取核糖体18S rRNA(18S rRNA)、肌动蛋白(ACTB)、延伸因子(EF1)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、核糖体蛋白L32(RPL32)、核糖体蛋白S13(RPS13)、核糖体蛋白S20(RPS20)和β-微管蛋白(TUB)基因作为候选内参基因,以geNorm、Normfinder和BestKeeper软件分析这8个基因在Bt毒素诱导后的小菜蛾不同品系中肠组织中的表达稳定性。并应用筛选出来的内参基因分析小菜蛾氨肽酶2(aminopeptidase N2,APN2)基因的表达水平。【结果】geNorm软件以RPS13和EF1为最稳定内参基因,NormFinder和BestKeeper软件均以RPS13和RPL32为最稳定基因。使用3种不同内参基因分析Bt毒素诱导后的小菜蛾Bt抗性和敏感品系中ANP2表达水平时,新的内参基因EF1和传统内参基因RPL32表现了良好的稳定性,二者作为标准化因子,ANP2表达量结果基本一致,而使用18S rRNA作为内参基因,却导致部分表达量分析结果有所误差。【结论】筛选出PRS13,RPL32和EF1可以作为小菜蛾某些试验条件下的内参基因,对小菜蛾基因表达研究奠定了一定基础,也对其他昆虫内参基因的筛选具有参考价值。
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