科研产出
华南生态型黄瓜'CU2'遗传转化体系的优化
《辣椒杂志 》 2024
摘要：黄瓜是一种具有重要经济和生物价值的蔬菜作物.基因组编辑技术的广泛应用推动了黄瓜育种改良和基因组功能表征研究的快速发展.目前华南生态型黄瓜品种仍缺乏具有普遍适用性农杆菌介导的遗传转化体系,这限制了基因组编辑技术的高效应用.本研究以华南生态型黄瓜品种'CU2'为材料,CsMATL基因编辑转基因株创制为例,进行遗传转化体系各种因素的优化,实现了该黄瓜品种外植体再分化芽的最高遗传转化率.研究结果表明选用SGM培养基,添加2 mg/L 6-BA、1 mg/L ABA后进行播种,在200 μmol/L AS浓度下侵染外植体,共培养后采用摇床以及两次200 mg/L TMT溶液和三次无菌水清洗脱菌,之后在含有100 mg/L Kan、2 mg/L 6-BA、1 mg/L ABA的分化培养基中进行分化培养,利用上述优化方案可将'CU2'的遗传转化率提高至 3.19%.该研究为华南生态型黄瓜遗传转化体系的优化和功能基因操作奠定了理论基础.
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大豆GmSDG25基因的克隆及拟南芥遗传转化
《分子植物育种 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：GmSDG25是拟南芥组蛋白赖氨酸甲基转移酶基因SDG25在大豆中的同源基因，为探究该基因的功能，本研究从栽培大豆品种‘湘春2701’中克隆到2个GmSDG25基因，分别命名为GmSDG25a和GmSDG25b，两者的全长cDNA长度分别是3 684和3 681 bp。通过构建过表达载体pFGC5941-35S::GmSDG25a/GmSDG25b，将其分别转化至拟南芥sdg25突变体中，对获得的T3代纯合转基因拟南芥植株进行表型鉴定和分子检测，发现该转基因植株sdg25-35S::GmSDG25a和sdg25-35S::GmSDG25b的开花时间均表现出晚于sdg25突变体，接近于野生型（Col）开花的表型；并且植株内与开花调控相关的FLC、FT、SOC1基因的表达量较之Col无明显差异，说明GmSDG25a和GmSDG25b基因在拟南芥sdg25突变体中异位表达，能够互补sdg25的早花表型，使其恢复至Col的开花表型，表明GmSDG25a和GmSDG25b基因可能具有与拟南芥SDG25相似的调控植物开花的生物学功能。研究结果将为后续揭示GmSDG25基因参与大豆开花时间调控的作用机制提供理论参考。
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辣椒胶孢炭疽菌遗传转化体系的建立
《植物保护 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：由辣椒胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides导致的辣椒炭疽病是辣椒生产上最为严重的真菌病害之一。本文以辣椒胶孢炭疽菌CSLL11为供试菌株,采用PEG-CaCl_2介导的原生质体转化法,将含有潮霉素B抗性基因和eGFP表达基因的DNA片段成功转入辣椒胶孢炭疽菌的原生质体中,获得了稳定表达绿色荧光的转化子,从而成功建立了辣椒胶孢炭疽菌的遗传转化体系。试验结果表明,可有效筛选阳性转化子的潮霉素B浓度为500 mg/L;PCR及Southern blot结果显示,eGFP表达基因已单拷贝整合至辣椒胶孢炭疽菌转化子的基因组中;使用荧光显微镜观察第一代及继代培养后的转化子,菌丝与分生孢子均表现出强烈的绿色荧光信号,说明GFP能在转化子中稳定遗传;将转化子与野生型菌株相比,菌落形态、生长速率及致病力水平无明显差异。本研究建立了辣椒胶孢炭疽菌遗传转化体系并获得了稳定表达绿色荧光蛋白的转化子,对辣椒炭疽菌与寄主互作的研究及病害防治具有重要意义。
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ACC氧化酶反义基因转化‘翠玉’猕猴桃
《分子植物育种 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为建立‘翠玉’猕猴桃基因功能研究技术平台并通过生物技术改良‘翠玉’猕猴桃,本研究以‘翠玉’猕猴桃叶片为实验材料,利用农杆菌介导法将ACC氧化酶(ACO)基因的反义链导入‘翠玉’猕猴桃,共获得14株潮霉素抗性植株。PCR鉴定结果显示,其中8株扩增获得了目的条带,初步统计阳性植株约为57.1%。随机挑选其中4株进行实时荧光定量PCR检测,结果表明,ACO基因的相对表达量是野生型植株的22%～41%。本研究为利用分子生物学手段改良‘翠玉’猕猴桃品种提供了工作基础。
关键词： 翠玉猕猴桃 反义RNA技术 农杆菌 组织培养 遗传转化
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甘蓝型油菜下胚轴一步不定芽再生培养及遗传转化应用
《分子植物育种 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：本研究建立了以甘蓝型油菜下胚轴为外植体的一步不定芽再生培养和遗传转化体系。首先,以甘蓝型油菜中双11号含部分子叶节的下胚轴为外植体,从6-BA和NAA配比、Ag NO3以及无菌苗苗龄等方面对影响油菜组织培养的因素进行了研究,建立了甘蓝型油菜快速高频一步不定芽再生培养技术体系。该技术体系为,切取5 d苗龄含部分子叶节的下胚轴置于添加4 mg/L 6-BA的MS基本培养基中培养,5 d再生出不定芽,再生频率为100%。在此基础上,进行了甘蓝型油菜的遗传转化,成功地将用p FGC5941双元载体构建的Bn TFL1基因干扰载体转入中双11号中。整个转化过程中,芽的诱导生成只需5 d,接着完成抗性芽的PPT筛选需要30 d,整个转化周期从播种到得到生根抗性苗仅需大约70 d,而传统转化方法抗性芽的诱导筛选需要90 d,整个转化周期需要130 d左右,大大缩短了转化周期,简化了转化过程,提高了转化效率。
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两用核不育系P88S愈伤组织的诱导及其遗传转化研究
《湖南农业科学 》 2013
摘要：以超级杂交水稻两用核不育系P88S为材料,研究了其愈伤组织的诱导及植物抗病基因snc1在愈伤组织中的遗传转化。结果表明:P88S成熟胚愈伤组织的最适诱导和继代培养基是NMB培养基,其中2,4-D和6-BA的最适浓度分别为3.0 mg/L和0.2mg/L,而添加0.5 g/L的酸水解酪蛋白和脯氨酸有利于愈伤组织的诱导。P88S成熟胚愈伤组织的最适分化培养基是DL分化培养基,麦芽糖为抗性愈伤组织分化的最适碳源。并通过农杆菌介导遗传转化法共获得5株转化稻株,经PCR检测其中1株含目的基因snc1。
关键词： 水稻 两用核不育系 P88S 愈伤组织诱导 遗传转化
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根癌农杆菌介导籼稻高效遗传转化体系的构建
《福建农业学报 》 2012
摘要：系统分析影响根癌农杆菌介导籼稻遗传转化的主要因素,比较不同培养基、培养条件、继代次数、菌液浓度、侵染时间等因素对籼稻遗传转化的影响,并组建一个高效的籼稻遗传转化技术体系。结果表明,成熟胚或幼胚经过NMB培养基诱导,NB培养基继代培养这样的培养基组合比较适合籼稻胚性愈伤组织的培养。在农杆菌介导转化时控制好菌液浓度、侵染时间以及分化培养基中KT和NAA的浓度配比,并进行预分化处理,可显著提高抗性植株的分化效率,减少白化苗的产生,最终使转化率提高到8%。
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