科研产出
ACC氧化酶反义基因转化‘翠玉’猕猴桃
《分子植物育种 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为建立‘翠玉’猕猴桃基因功能研究技术平台并通过生物技术改良‘翠玉’猕猴桃,本研究以‘翠玉’猕猴桃叶片为实验材料,利用农杆菌介导法将ACC氧化酶(ACO)基因的反义链导入‘翠玉’猕猴桃,共获得14株潮霉素抗性植株。PCR鉴定结果显示,其中8株扩增获得了目的条带,初步统计阳性植株约为57.1%。随机挑选其中4株进行实时荧光定量PCR检测,结果表明,ACO基因的相对表达量是野生型植株的22%～41%。本研究为利用分子生物学手段改良‘翠玉’猕猴桃品种提供了工作基础。
关键词： 翠玉猕猴桃 反义RNA技术 农杆菌 组织培养 遗传转化
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辣椒胶孢炭疽菌遗传转化体系的建立
《植物保护 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：由辣椒胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides导致的辣椒炭疽病是辣椒生产上最为严重的真菌病害之一。本文以辣椒胶孢炭疽菌CSLL11为供试菌株,采用PEG-CaCl_2介导的原生质体转化法,将含有潮霉素B抗性基因和eGFP表达基因的DNA片段成功转入辣椒胶孢炭疽菌的原生质体中,获得了稳定表达绿色荧光的转化子,从而成功建立了辣椒胶孢炭疽菌的遗传转化体系。试验结果表明,可有效筛选阳性转化子的潮霉素B浓度为500 mg/L;PCR及Southern blot结果显示,eGFP表达基因已单拷贝整合至辣椒胶孢炭疽菌转化子的基因组中;使用荧光显微镜观察第一代及继代培养后的转化子,菌丝与分生孢子均表现出强烈的绿色荧光信号,说明GFP能在转化子中稳定遗传;将转化子与野生型菌株相比,菌落形态、生长速率及致病力水平无明显差异。本研究建立了辣椒胶孢炭疽菌遗传转化体系并获得了稳定表达绿色荧光蛋白的转化子,对辣椒炭疽菌与寄主互作的研究及病害防治具有重要意义。
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甘蓝型油菜下胚轴一步不定芽再生培养及遗传转化应用
《分子植物育种 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：本研究建立了以甘蓝型油菜下胚轴为外植体的一步不定芽再生培养和遗传转化体系。首先,以甘蓝型油菜中双11号含部分子叶节的下胚轴为外植体,从6-BA和NAA配比、Ag NO3以及无菌苗苗龄等方面对影响油菜组织培养的因素进行了研究,建立了甘蓝型油菜快速高频一步不定芽再生培养技术体系。该技术体系为,切取5 d苗龄含部分子叶节的下胚轴置于添加4 mg/L 6-BA的MS基本培养基中培养,5 d再生出不定芽,再生频率为100%。在此基础上,进行了甘蓝型油菜的遗传转化,成功地将用p FGC5941双元载体构建的Bn TFL1基因干扰载体转入中双11号中。整个转化过程中,芽的诱导生成只需5 d,接着完成抗性芽的PPT筛选需要30 d,整个转化周期从播种到得到生根抗性苗仅需大约70 d,而传统转化方法抗性芽的诱导筛选需要90 d,整个转化周期需要130 d左右,大大缩短了转化周期,简化了转化过程,提高了转化效率。
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两用核不育系P88S愈伤组织的诱导及其遗传转化研究
《湖南农业科学 》 2013
摘要：以超级杂交水稻两用核不育系P88S为材料,研究了其愈伤组织的诱导及植物抗病基因snc1在愈伤组织中的遗传转化。结果表明:P88S成熟胚愈伤组织的最适诱导和继代培养基是NMB培养基,其中2,4-D和6-BA的最适浓度分别为3.0 mg/L和0.2mg/L,而添加0.5 g/L的酸水解酪蛋白和脯氨酸有利于愈伤组织的诱导。P88S成熟胚愈伤组织的最适分化培养基是DL分化培养基,麦芽糖为抗性愈伤组织分化的最适碳源。并通过农杆菌介导遗传转化法共获得5株转化稻株,经PCR检测其中1株含目的基因snc1。
关键词： 水稻 两用核不育系 P88S 愈伤组织诱导 遗传转化
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根癌农杆菌介导籼稻高效遗传转化体系的构建
《福建农业学报 》 2012
摘要：系统分析影响根癌农杆菌介导籼稻遗传转化的主要因素,比较不同培养基、培养条件、继代次数、菌液浓度、侵染时间等因素对籼稻遗传转化的影响,并组建一个高效的籼稻遗传转化技术体系。结果表明,成熟胚或幼胚经过NMB培养基诱导,NB培养基继代培养这样的培养基组合比较适合籼稻胚性愈伤组织的培养。在农杆菌介导转化时控制好菌液浓度、侵染时间以及分化培养基中KT和NAA的浓度配比,并进行预分化处理,可显著提高抗性植株的分化效率,减少白化苗的产生,最终使转化率提高到8%。
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