科研产出
纳米材料层状双氢氧化物(LDH)对茄二十八星瓢虫dsECR致死效应的影响
《环境昆虫学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：纳米材料被视为重要的RNA干扰增效物质。层状双氢氧化物（LDH）是具有生物相容性的可降解纳米材料，可以显著提高dsRNA防控黄瓜花叶病毒的效果。为明确LDH能否提高昆虫RNA干扰的效果，以期促进RNA生物农药在农业害虫防治中的应用和推广，本研究选择茄二十八星瓢虫Henosepilachna vigintioctopunctata的EcR基因进行RNA干扰介导的致死效应研究。将LDH与dsEcR组装形成复合物LDH-dsEcR,利用琼脂糖凝胶电泳确定LDH-dsEcR的最佳装载比例。通过静置法检测LDH-dsEcR的稳定性，借助透射电子显微镜验证其组装状态。采用浸叶法测定LDH-dsEcR的增效性，使用体视镜观察其对试虫形态的影响。结果表明：LDH与dsEcR可形成稳定的复合物，其最佳装载比为16∶1。LDH对茄二十八星瓢虫无毒性，但经LDH与dsEcR处理，部分试虫虫体呈黑褐色，或无法蜕皮化蛹，或维持在预蛹状态。遗憾的是LDH-dsEcR复合物的增效作用不明显，推测昆虫肠道的酸碱度可能是影响LDH-dsRNA增效的因素之一。本研究首次为利用LDH研究昆虫RNA生物农药提供了可观的理论基础。
关键词： 纳米材料 层状双氢氧化物 LDH 茄二十八星瓢虫 RNA干扰
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水稻UDP-N-乙酰葡萄糖胺酰基转移酶基因(OsLpxA)RNA干扰载体的构建及遗传转化
《分子植物育种 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：细菌脂多糖由O-抗原,核心多糖和脂质A三部分组成,脂质A是细菌内毒素活性的根源。植物脂多糖与细菌脂多糖组成基本相似,但不具有微生物脂多糖的高毒性。目前,对植物脂多糖的合成机制缺乏最基本的认识,因此研究植物脂多糖的合成具有重要的科学价值。作者在水稻基因组中发现一个含有大肠杆菌Ec Lpx A功能结构域的基因,命名为OsLpxA,该基因催化水稻脂质A合成的第一步反应。本研究用水稻(Oryza sativa subsp.Japonica)苗期的叶片为材料,提取总RNA并以此为模板,用反转录PCR扩增OsLpxA基因的si RNA靶序列,并将其连接到表达载体p TCK303上,构建了RNA干扰载体p TCK303-OsLpxA-RNAi。将该载体通过农杆菌介导法转化水稻,共获得59株具有潮霉素抗性的转化苗。然后利用潮霉素的特异性引物对全部抗性苗进行PCR检测,其中有38株转化苗呈阳性,表明潮霉素标记基因已整合到了水稻的基因组中。最后,利用定量PCR检测38株阳性苗中OsLpxA基因在转录水平表达的变化。结果表明,其中27株阳性苗中导入的OsLpxA基因RNA干扰结构成功地降低了目的基因的表达。该结果为后续对OsLpxA基因功能的研究提供参考。
关键词： 水稻 UDP-N-乙酰葡萄糖胺酰基转移酶基因 RNA干扰 脂质A
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RNAi介导的棉铃虫细胞色素P450酶系几种组分基因沉默对高效氯氰菊酯毒力的影响(英文)
《植物保护学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为进一步明确细胞色素P450 CYP6B7、细胞色素b5(cytochrome b5,Cyt-b5)和细胞色素P450还原酶(cytochrome P450 reductase,CPR)在棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)对拟除虫菊酯类药剂抗性中的作用,通过RNA干扰技术沉默了抗氰戊菊酯棉铃虫中3种组分的基因,并测定基因沉默后高效氯氰菊酯对棉铃虫的毒力变化。结果显示,经单个CYP6B7或CYP6B7与CPR、Cyt-b5基因的双链RNA注射处理后12~48 h,棉铃虫幼虫死亡率在19.4%~92.5%之间,明显高于空白对照处理的10.47%~62.87%;高效氯氰菊酯对基因沉默后幼虫的LD50值随着时间的延长而逐渐下降,12~48 h的LD50值在0.97~2.97μg/头之间,而空白对照处理为2.27~3.57μg/头。研究表明,细胞色素P450 CYP6B7,或CYP6B7与CPR、Cyt-b5基因的沉默,可提高高效氯氰菊酯对抗性棉铃虫的毒力,进一步证明了CYP6B7、CPR和Cyt-b5在棉铃虫对菊酯类药剂抗性中起着重要作用。
关键词： 棉铃虫 细胞色素P450酶系 RNA干扰 抗药性 实时定量PCR
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RNA干扰及其对昆虫抗药性相关基因的沉默研究
《棉花学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：以不同农药为主的防治策略对棉铃虫和小菜蛾等农业害虫的控制卓有成效,但易产生害虫抗药性问题。害虫抗药性与细胞色素P450酶系、酯酶、钙粘蛋白等酶或受体的生化与分子机理相关。RNA干扰(RNA in-terference,简称RNAi)作为分子生物学领域中功能基因及基因组研究的一种强有力工具,已逐渐用于昆虫抗药性相关基因的敲除研究并鉴定其功能。本文围绕RNAi的作用机理及其对昆虫抗药性相关基因的沉默研究展开综述,旨在为农业害虫及其抗药性治理提供新思路与新途径。
关键词： RNA干扰 细胞色素P450酶 酯酶 钙粘蛋白 抗药性
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