科研产出
东乡野生稻苗期低温诱导表达新基因BGIOSGA013293-DX的过表达载体构建与转化
《杂交水稻 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：结合表达谱数据分析,参考公共数据库中的序列信息设计引物,利用RT-PCR技术,从东乡野生稻中获得了1个在低温诱导条件下高表达的螺旋—环—螺旋结构域蛋白基因BGIOSGA013293-DX的全长c DNA,并构建了其过表达载体。序列比对分析表明,该基因位点在93-11中编码308个氨基酸,而在东乡野生稻中编码335个氨基酸,比93-11多27个氨基酸。且这27个氨基酸连续分布在一起,另外还有1个氨基酸的差异。利用农杆菌介导法将BGIOSGA013293-DX转入水稻受体品种93-11,获得了9株过表达转基因水稻植株,经潮霉素抗性标记基因PCR阳性检测和GUS检测,获得的转基因植株为携带BGIOSGA013293-DX的阳性植株。
关键词： 东乡野生稻 苗期耐冷性 基因克隆 螺旋-环-螺旋结构域蛋白
全文链接
请求原文
水稻叶绿体TALEN载体的构建及在大肠杆菌中的表达
《杂交水稻 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：将类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)打靶技术运用到水稻叶绿体转化体系中,有可能提高外源基因在水稻叶绿体基因组中的整合效率。根据叶绿体表达载体上的同源重组序列,构建了水稻叶绿体TALEN载体,经分子检测和DNA测序分析证明载体构建成功;将该载体转化大肠杆菌,载体上携带的EGFP、hpt和Fok基因在大肠杆菌中得到成功表达,说明构建的水稻叶绿体TALEN载体能够在原核系统中有效表达。
全文链接
请求原文
Achaetomium sp.Xz8甘露聚糖酶在毕赤酵母中的表达及其酶学性质分析
《核农学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：甘露聚糖酶作为最主要的半纤维素酶类现已被广泛地应用在饲料、造纸、洗涤剂、食品及石油开采等领域。本研究从高温真菌Achaetomium sp.Xz8菌株中利用兼并引物和Thermal asymmetric interlaced PCR(Tail-PCR)的方法克隆获得一个新的糖苷水解酶5家族的甘露聚糖酶基因(man5Xz8)。基因全长1 239bp,序列分析发现其编码412个氨基酸和1个终止密码子,预测的信号肽序列为N端的20个氨基酸。将成熟蛋白序列克隆到毕赤酵母分泌型表达载体p PIC9中,利用甲醇诱导重组酵母菌表达目的蛋白,经SDS-PAGE电泳分析,表达蛋白分子量约55.0 k Da。对其酶学性质进行测定,Man5Xz8的最适p H值为5.0,在p H值9.0可以保持40%以上的酶活性,在p H值5.0~9.0具有良好的p H稳定性。最适作用温度为50℃,并对SDS具有较高的耐受性。以角豆胶为底物,Man5Xz8的比活、Km及Vmax值分别为101.6 U·mg-1、4.4 mg·m L-1、128.2μmol·min-1·mg-1。因此,Man5Xz8为后期研究甘露聚糖酶的工业应用和酸碱催化机制提供了良好的材料。
关键词： Achaetomium sp.Xz8 甘露聚糖酶 克隆 毕赤酵母 酶学性质
全文链接
请求原文
番茄斑萎病毒YN-1株系G_N/G_C基因的克隆与分析
《植物保护 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：作者以TSWV YN-1株系为研究材料,克隆了其GN/GC基因,测序后与GenBank中TSWV其他株系GN/GC基因进行比对,结果显示:YN-1GN/GC基因全长3 408bp,编码1 135个氨基酸,构建的系统发育树可分为4个群,YN-1属于群Ⅱ,与源自西班牙的SPAIN-2株系的GN/GC基因核苷酸相似性最高,达98.88%,氨基酸相似性达98.85%。YN-1株系N基因和GN/GC基因的起源不同,我们推断YN-1可能是一个发生重排(reassortment)的新株系,是不同地理起源的株系在共同传播过程中发生了重排的结果,具体原因有待进一步研究。
全文链接
请求原文
RT-PCR克隆籼稻叶绿素a/b结合蛋白基因全长cDNA及序列的in silico分析
《基因组学与应用生物学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：根据日本晴cab4基因序列(GenBank:AK104499.1)设计引物,用RT-PCR的方法从籼稻9311中克隆了叶绿素a/b结合蛋白基因的全长cDNA,命名为cab-9311(cab gene from 9311)。insilico分析表明:cab-9311与cab4基因同源性为99%,编码的蛋白含有244个氨基酸,与cab4基因编码的蛋白同源性为98%。蛋白分子质量为26.9kD,理论等电点为6.52。第54位～第216位氨基酸是一个典型的叶绿素a/b结合蛋白功能域(chlorophyll a/bbinding domain)。跨膜分析和蛋白质三级预测显示,该蛋白在C端有一个典型的跨膜区。亚细胞定位分析表明该蛋白定位于叶绿体,是一个叶绿体内囊体膜上的锚定蛋白。
关键词： 水稻 叶绿素a/b结合蛋白基因 克隆 in silico分析
全文链接
请求原文
3个水稻WAX2同源基因表达的组织特异性及逆境响应特征
《作物学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：利用拟南芥的WAX2基因序列BLAST检索出3个水稻同源基因,命名为OsWAX2-1、OsWAX2-2和OsWAX2-3,与拟南芥WAX2基因的同源性分别为56.0%、55.2%和52.0%;其预测的编码蛋白与WAX2蛋白的同源性分别为61.5%、60.5%和64.7%。这3个蛋白都分别存在4个跨膜结构区和1个甾醇去饱和酶的保守区,说明它们都属于跨膜蛋白并可能与角质层的蜡质合成有关。采用半定量RT-PCR方法检测3个OsWAX2基因在水稻不同部位的表达情况,及高温、低温、NaCl、PEG和ABA5种处理对3个OsWAX2基因在转录水平表达的影响。结果表明,3个OsWAX2基因在水稻中的表达存在时空差异,3个基因在水稻萌动的胚中表达量都很高,OsWAX2-3基因在叶中的表达量最高;3个OsWAX2基因对高温、低温、盐、干旱及ABA胁迫响应也存在差别,OsWAX2-1只在ABA处理时增强表达;OsWAX2-2受高温、低温、盐、干旱胁迫及ABA诱导并且响应迅速。这一结果为进一步研究OsWAX2基因在水稻生长发育过程及逆境胁迫下的功能与作用机制提供了参考。
关键词： 水稻 WAX2同源基因 半定量RT-PCR 表达 逆境响应
全文链接
请求原文
