科研产出
辣椒斑驳病毒CP蛋白多克隆抗体制备与应用
《福建农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：【目的】辣椒斑驳病毒（Pepper mottle virus,PepMoV）是近年来生产上主要侵染辣椒的新发病毒之一，目前有在我国快速扩展的趋势，因此，亟需开展该病毒的特异性快速检测技术，为明确该病毒在我国辣椒主产区的分布、发生致害规律及机制等研究提供科学手段。本研究以PepMoV编码的外壳蛋白CP为免疫源，制备特异性多克隆抗体，建立PepMoV的特异性快速检测方法，为PepMoV的分布和发生致害规律等研究奠定基础。【方法】采用特异性RT-PCR技术，从感染PepMoV辣椒的cDNA中扩增获得片段大小为822 bp的CP基因，并克隆到原核表达载体pET28α，转化E coli DH5α中进行诱导表达，采用Ni-NTA柱层析纯化。以纯化的重组CP蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备特异性多克隆抗体。制备的多克隆抗体采用ID-ELISA和Western blotting检测。【结果】获得原核表达的PepMoV重组CP蛋白，SDS-PAGE结果表明纯化蛋白为分子量约为37 kDa的单一条带。Western blotting和IDELISA检测结果表明，制备的多克隆抗体特异性高，仅识别PepMoV CP蛋白，不识别寄主蛋白和其他选择的马铃薯Y病毒；田间样本检测结果表明，PepMoV在湖南和贵州辣椒上的检出率为20.00%和43.33%。【结论】基于PepMoV CP蛋白特异性多克隆抗体建立的PepMoV快速检测方法，可为进一步深入研究该病毒在我国的分布和发生规律提供科学手段，也为该病毒CP蛋白的功能研究奠定基础。
关键词： 辣椒斑驳病毒 CP基因 多克隆抗体 间接ELISA 快速检测
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重金属镉单克隆抗体的制备与性质分析
《食品科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：通过双功能螯合剂iEDTA螯合Cd2+并偶联卵白蛋白(OVA)和牛血清白蛋白(BSA),合成免疫抗原Cd-iEDTAOVA和筛选抗原Cd-iEDTA-BSA;以Cd-iEDTA-OVA注射BALB/c小鼠,制备Cd2+单克隆抗体,以Cd-iEDTA-BSA通过酶联免疫吸附法(ELISA)进行筛选,并分析抗体性质。结果表明:以Cd2+和OVA含量分别为174.6230μg/L、1.7892mg/mL的Cd-iEDTA-OVA抗原免疫小鼠,Cd2+和BSA含量分别为48.1881μg/L、1.8065mg/mL的Cd-iEDTA-BSA抗原筛选,可获得7F4和7E8两株特异性较好的杂交瘤细胞;7E8E5、7E8G9、7F4B8、7F4D6和7F4H8共5株高纯度单抗,均属IgG1型,其中7E8E5效价最高,达1:512000,亲和常数也最高,达4.55×108L/mol。建立了Cd2+间接竞争ELISA法,IC50为1150ng/mL,检测限为260ng/mL(R2=0.9916);与Hg2+有较强交叉,与Zn2+、Cu2+、Ca2+交叉较弱,与Mg2+、Ni2+、Al3+、Pb2+、Ba2+几乎无交叉。
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甲氰菊酯多克隆抗体的制备
《农药 》 2009 北大核心
摘要：利用水溶性碳二亚胺法将甲氰菊酯的合成前体甲氰菊酸与牛血清蛋白偶联,合成了甲氰菊酯的免疫半抗原,免疫新西兰大白兔获得了甲氰菊酯多克隆抗体。通过紫外扫描分析,免疫原中甲氰菊酸分子与蛋白质分子的偶联比为8.8:1,50%饱和硫酸铵法纯化抗体,间接ELISA法测定多克隆抗体效价达1:12800,最适甲氰菊酸-OVA包被抗原质量浓度为1.0mg/L;最低检出限为8.5μg/L。以抗体与甲氰菊酯的反应率为100%,抗体与其他4种菊酯类农药交叉反应率很低,与溴氰菊酯交叉反应较高。结果表明:制备的甲氰菊酯多克隆抗体具有较高的特异性,可用于甲氰菊酯残留的检测。
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