文献类型： 中文期刊

作者： 王鑫 ¹ ; 叶倩 ² ; 吕小园 ³ ; 田培洁 ² ; 张松柏 ¹ ; 张宇 ² ; 张德咏 ¹ ; 罗香文 ¹ ;

作者机构： 1.湖南大学生物学院隆平分院

2.湖南省植物保护研究所

3.长沙海关技术中心

关键词： 辣椒斑驳病毒;CP基因;多克隆抗体;间接ELISA;快速检测

期刊名称： 福建农业学报

ISSN： 1008-0384

年卷期： 2022 年 012 期

页码： 1595-1600

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】辣椒斑驳病毒（Pepper mottle virus,PepMoV）是近年来生产上主要侵染辣椒的新发病毒之一，目前有在我国快速扩展的趋势，因此，亟需开展该病毒的特异性快速检测技术，为明确该病毒在我国辣椒主产区的分布、发生致害规律及机制等研究提供科学手段。本研究以PepMoV编码的外壳蛋白CP为免疫源，制备特异性多克隆抗体，建立PepMoV的特异性快速检测方法，为PepMoV的分布和发生致害规律等研究奠定基础。【方法】采用特异性RT-PCR技术，从感染PepMoV辣椒的cDNA中扩增获得片段大小为822 bp的CP基因，并克隆到原核表达载体pET28α，转化E coli DH5α中进行诱导表达，采用Ni-NTA柱层析纯化。以纯化的重组CP蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备特异性多克隆抗体。制备的多克隆抗体采用ID-ELISA和Western blotting检测。【结果】获得原核表达的PepMoV重组CP蛋白，SDS-PAGE结果表明纯化蛋白为分子量约为37 kDa的单一条带。Western blotting和IDELISA检测结果表明，制备的多克隆抗体特异性高，仅识别PepMoV CP蛋白，不识别寄主蛋白和其他选择的马铃薯Y病毒；田间样本检测结果表明，PepMoV在湖南和贵州辣椒上的检出率为20.00%和43.33%。【结论】基于PepMoV CP蛋白特异性多克隆抗体建立的PepMoV快速检测方法，可为进一步深入研究该病毒在我国的分布和发生规律提供科学手段，也为该病毒CP蛋白的功能研究奠定基础。