科研产出
辣椒斑驳病毒CP蛋白多克隆抗体制备与应用
《福建农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：【目的】辣椒斑驳病毒（Pepper mottle virus,PepMoV）是近年来生产上主要侵染辣椒的新发病毒之一，目前有在我国快速扩展的趋势，因此，亟需开展该病毒的特异性快速检测技术，为明确该病毒在我国辣椒主产区的分布、发生致害规律及机制等研究提供科学手段。本研究以PepMoV编码的外壳蛋白CP为免疫源，制备特异性多克隆抗体，建立PepMoV的特异性快速检测方法，为PepMoV的分布和发生致害规律等研究奠定基础。【方法】采用特异性RT-PCR技术，从感染PepMoV辣椒的cDNA中扩增获得片段大小为822 bp的CP基因，并克隆到原核表达载体pET28α，转化E coli DH5α中进行诱导表达，采用Ni-NTA柱层析纯化。以纯化的重组CP蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备特异性多克隆抗体。制备的多克隆抗体采用ID-ELISA和Western blotting检测。【结果】获得原核表达的PepMoV重组CP蛋白，SDS-PAGE结果表明纯化蛋白为分子量约为37 kDa的单一条带。Western blotting和IDELISA检测结果表明，制备的多克隆抗体特异性高，仅识别PepMoV CP蛋白，不识别寄主蛋白和其他选择的马铃薯Y病毒；田间样本检测结果表明，PepMoV在湖南和贵州辣椒上的检出率为20.00%和43.33%。【结论】基于PepMoV CP蛋白特异性多克隆抗体建立的PepMoV快速检测方法，可为进一步深入研究该病毒在我国的分布和发生规律提供科学手段，也为该病毒CP蛋白的功能研究奠定基础。
关键词： 辣椒斑驳病毒 CP基因 多克隆抗体 间接ELISA 快速检测
全文链接
请求原文
贵州辣椒叶脉黄化病毒分离物检测及其P0、CP、MP基因进化分析
《园艺学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：为明确辣椒叶脉黄化病毒（Pepper vein yellows virus,PeVYV）在贵州辣椒上的发生分布及其分子变异情况。用RT-PCR法对采自贵州省25个采样地点的548份辣椒疑似病毒病样品进行检测。结果表明:129份为阳性样品,检出率为23.54%。将获得的14个不同采样点PeVYV分离物和已报道的中国和其他国家PeVYV分离物进行序列比对,P0基因核苷酸同源性为90.9%～100.0%,氨基酸相似性为97.7%～100.0%;CP基因核苷酸同源性为93.7%～100.0%,氨基酸相似性为97.9%～100.0%;MP基因核苷酸同源性为94.7%～100.0%,氨基酸相似性均为100.0%。在系统进化树中,有13个采样点PeVYV分离物P0基因聚在一起,与中国分离物（KP326573）的亲缘关系较近,而遵义播州PeVYV分离物与澳大利亚分离物的亲缘关系较近。贵州所有PeVYV分离物CP基因与中国、澳大利亚、美国和西班牙分离物聚为一支,但不同采样点的PeVYV分离物又聚为两个不同的分支。而不同采样点MP基因全部聚在一起,且与其他地区PeVYV分离物的差异不明显。研究结果表明贵州辣椒上不同地区PeVYV分离物具有一定的分子差异,存在遗传分化现象。
关键词： 辣椒 辣椒叶脉黄化病毒 P0基因 CP基因 MP基因
全文链接
请求原文
湖南和福建辣椒上辣椒脉斑驳病毒的检测及系统发育分析
《江苏农业科学 》 2016 北大核心
摘要：辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV),目前在我国仅有在海南黄灯笼辣椒上严重危害的报道。利用湖南省和福建省采集的辣椒样本,检测辣椒ChiVMV的检出率,并克隆ChiVMV的CP基因序列,用邻近法构建了系统进化树,分析其遗传进化情况。结果表明,辣椒的ChiVMV省检出率湖南省为25%,福建省为20%;克隆了湖南省和福建省ChiVMV CP基因各1个,系统发育表明,湖南省和福建的ChiVMV株系与源于韩国ChiVMV株系聚在一个亚簇,而与我国其他地区ChiVMV亲缘关系较远,表明侵染辣椒的ChiVMV在我国进一步扩展,且存在遗传分化趋势。
全文链接
请求原文
首页上一页1下一页尾页
