科研产出
辣椒斑驳病毒CP蛋白多克隆抗体制备与应用
《福建农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：【目的】辣椒斑驳病毒（Pepper mottle virus,PepMoV）是近年来生产上主要侵染辣椒的新发病毒之一，目前有在我国快速扩展的趋势，因此，亟需开展该病毒的特异性快速检测技术，为明确该病毒在我国辣椒主产区的分布、发生致害规律及机制等研究提供科学手段。本研究以PepMoV编码的外壳蛋白CP为免疫源，制备特异性多克隆抗体，建立PepMoV的特异性快速检测方法，为PepMoV的分布和发生致害规律等研究奠定基础。【方法】采用特异性RT-PCR技术，从感染PepMoV辣椒的cDNA中扩增获得片段大小为822 bp的CP基因，并克隆到原核表达载体pET28α，转化E coli DH5α中进行诱导表达，采用Ni-NTA柱层析纯化。以纯化的重组CP蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备特异性多克隆抗体。制备的多克隆抗体采用ID-ELISA和Western blotting检测。【结果】获得原核表达的PepMoV重组CP蛋白，SDS-PAGE结果表明纯化蛋白为分子量约为37 kDa的单一条带。Western blotting和IDELISA检测结果表明，制备的多克隆抗体特异性高，仅识别PepMoV CP蛋白，不识别寄主蛋白和其他选择的马铃薯Y病毒；田间样本检测结果表明，PepMoV在湖南和贵州辣椒上的检出率为20.00%和43.33%。【结论】基于PepMoV CP蛋白特异性多克隆抗体建立的PepMoV快速检测方法，可为进一步深入研究该病毒在我国的分布和发生规律提供科学手段，也为该病毒CP蛋白的功能研究奠定基础。
关键词： 辣椒斑驳病毒 CP基因 多克隆抗体 间接ELISA 快速检测
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番茄斑萎病毒核衣壳蛋白N及膜多糖蛋白Gn的多克隆抗体制备及应用
《福建农业学报 》 2018 北大核心
摘要：由番茄斑萎病毒Tomato spotted wilt orthotospovirus (TSWV)侵染引起的番茄斑萎病毒病在我国蔬菜、花卉等作物上造成了严重的经济损失。本研究克隆了TSWV核衣蛋白N基因及膜多糖蛋白Gn基因,利用Gateway系统获得N和Gn基因的原核表达载体。将其转化到大肠杆菌表达菌株Rosetta (DE3)细胞内,IPTG诱导表达N蛋白和Gn蛋白,以此为抗原分别免疫新西兰大白兔,制备N蛋白和Gn蛋白的多克隆抗体。Western blot检测结果表明,N蛋白的多克隆抗体能够与N蛋白发生特异性结合反应,间接酶联免疫吸附(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,in-ELISA)分析检测表明抗体滴度为1∶12 800,而Gn蛋白的多克隆抗体特异性差,效价未检出。本研究制备的N蛋白多克隆抗体可用于田间病株的病害诊断,同时有助于开展病毒在介体昆虫内定位、病毒和介体昆虫互作及功能分析的研究。
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甲氰菊酯多克隆抗体的制备
《农药 》 2009 北大核心
摘要：利用水溶性碳二亚胺法将甲氰菊酯的合成前体甲氰菊酸与牛血清蛋白偶联,合成了甲氰菊酯的免疫半抗原,免疫新西兰大白兔获得了甲氰菊酯多克隆抗体。通过紫外扫描分析,免疫原中甲氰菊酸分子与蛋白质分子的偶联比为8.8:1,50%饱和硫酸铵法纯化抗体,间接ELISA法测定多克隆抗体效价达1:12800,最适甲氰菊酸-OVA包被抗原质量浓度为1.0mg/L;最低检出限为8.5μg/L。以抗体与甲氰菊酯的反应率为100%,抗体与其他4种菊酯类农药交叉反应率很低,与溴氰菊酯交叉反应较高。结果表明:制备的甲氰菊酯多克隆抗体具有较高的特异性,可用于甲氰菊酯残留的检测。
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