烟草花叶病毒P54基因的原核表达与蛋白纯化

李聪; 田培洁; 张宇; 张德咏; 刘勇; 张松柏; 《福建农业学报 》 2021 CSCD

摘要：【目的】烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）编码的与复制相关通读P183基因中,编码一个P54基因,其功能及其作用分子机制还鲜见报道。为获得P54蛋白纯化样品开展本研究,以期为P54蛋白的功能及其作用分子机制研究奠定基础。【方法】采用RT-PCR技术,从感染TMV的三生烟（Nicotiana tabacum var. Samsun NN）cDNA中扩增获得片段大小为1 425 bp的烟草花叶病毒P54基因,并克隆到原核表达载体pEASY-Blunt E1,转化E coli BL21（DE3）中进行诱导表达,包涵体透析复性后采用Ni-NTA柱层析纯化,Western-blotting进行鉴定。【结果】原核表达的TMV P54蛋白,主要以包涵体的形式存在;复性后经Ni-NTA柱层析纯化,SDS-PAGE表明纯化蛋白为一分子量约为60 kDa的单一条带。Western-blotting结果证实纯化蛋白为P54重组蛋白。【结论】本研究纯化得到了重组P54蛋白,为进一步深入研究P54蛋白的功能奠定基础。

关键词： 烟草花叶病毒 P54基因 原核表达 蛋白纯化