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烟草花叶病毒P54基因的原核表达与蛋白纯化

文献类型： 中文期刊

作者： 李聪 1 ; 田培洁 2 ; 张宇 3 ; 张德咏 1 ; 刘勇 1 ; 张松柏 1 ;

作者机构： 1.湖南大学研究生院隆平分院

2.湖南农业大学生物安全科学技术学院

3.湖南省植物保护研究所

关键词： 烟草花叶病毒;P54基因;原核表达;蛋白纯化

期刊名称： 福建农业学报

ISSN：

年卷期： 2021 年 002 期

页码： 209-214

收录情况： CSCD

摘要： 【目的】烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）编码的与复制相关通读P183基因中,编码一个P54基因,其功能及其作用分子机制还鲜见报道。为获得P54蛋白纯化样品开展本研究,以期为P54蛋白的功能及其作用分子机制研究奠定基础。【方法】采用RT-PCR技术,从感染TMV的三生烟（Nicotiana tabacum var. Samsun NN）cDNA中扩增获得片段大小为1 425 bp的烟草花叶病毒P54基因,并克隆到原核表达载体pEASY-Blunt E1,转化E coli BL21（DE3）中进行诱导表达,包涵体透析复性后采用Ni-NTA柱层析纯化,Western-blotting进行鉴定。【结果】原核表达的TMV P54蛋白,主要以包涵体的形式存在;复性后经Ni-NTA柱层析纯化,SDS-PAGE表明纯化蛋白为一分子量约为60 kDa的单一条带。Western-blotting结果证实纯化蛋白为P54重组蛋白。【结论】本研究纯化得到了重组P54蛋白,为进一步深入研究P54蛋白的功能奠定基础。

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