甘蓝型油菜pep基因片段的克隆和种子特异性反义表达载体的构建

白德朗; 陈烈臣; 熊兴华; 李栒; 官春云; 《湖南农业大学学报(自然科学版) 》 2005 北大核心 CSCD

摘要：丙酮酸羧化酶(PEP)是控制油菜蛋白质/油脂含量比例的一个关键酶,抑制种子中pepc基因的表达,使其底物(丙酮酸)更多地朝生成油脂的方向流动,对提高种子的含油量,增加油菜的经济价值具有重要的意义.利用PCR技术从甘蓝型油菜湘油15号基因组中扩增了PEP基因片段,并将其克隆到pGEM-TEasy载体上进行测序.测序结果表明:扩增片段长576bp,与Yannai报道的PEP基因相应区域的同源性为95%.用扩增引物上设计的BamHI和SacI两位点酶将PEP基因片段切下,反向插入到pBI121.N质粒的Napin启动子之后,构建了种子特异性反义PEP表达载体,并通过农杆菌介导法将反义PEP基因转化到湘油15号中.

关键词： 甘蓝型油菜 PCR 反义PEP 种子特异性表达载体