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黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因克隆及在病毒检测中的应用

文献类型： 中文期刊

作者： 张德咏 1 ; 王小平 1 ; 周雪平 1 ; 李德葆 1 ;

作者机构： 1.湖南省蔬菜研究所!长沙,410125,湖南省蔬菜研究所!长沙,410125,湖南省蔬菜研究所!长沙,410125,浙江大学生物技术研究所!杭州,310029,浙江大学生物技术研究所!杭州,310029

关键词： 黄瓜花叶病毒;外壳蛋白基因;克隆;检测

期刊名称： 湖南农业大学学报

ISSN： 1007-1032

年卷期： 1999 年 05 期

页码：

收录情况： CSCD

摘要： 根据已经发表的黄瓜花叶病毒(CMV)外壳蛋白基因的序列,人工合成引物,通过反转录和PCR扩增并克隆了黄瓜花叶病毒辣椒分离物P33(CMV-P33)的外壳蛋白基因,构建到质粒PBS的Hinc位点.重组质粒经Sma酶切后,在0.8%低熔点琼脂糖上电泳,回收克隆的CP基因片段(约0.7kb),用切口平移的方法进行α-32PdATP标记.以此为探针,通过点杂交技术检测提纯的病毒CMV-P33和R1株系、CMV-P33的RNA,及受CMV侵染的辣椒叶片汁液,结果表明:提纯的CMV-P33和R1株系的最低检出量分别为1ng和4ng,CMV-P33的RNA为0.1ng.检测受CMV侵染的辣椒叶片汁液时,最大稀释倍数为100倍.其次,用该探针检测健康辣椒和受烟草花叶病毒(TMV)、马铃薯Y病毒侵染的烟叶汁液时,检测反应均为阴性.

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