文献类型： 中文期刊

作者： 余东 ¹ ; 董皓 ² ; 孙志忠 ³ ; 孙学武 ¹ ; 谭炎宁 ¹ ; 盛夏冰 ³ ; 段美娟 ⁴ ; 袁定阳 ² ;

作者机构： 1.国家杂交水稻工程技术研究中心

2.湖南大学研究生院隆平分院

3.湖南杂交水稻研究中心杂交水稻国家重点实验室

4.湖南农业大学农学院

关键词： TA克隆;pMD18-T载体;p18K-T载体;Eam1105Ⅰ限制性核酸内切酶

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2019 年 011 期

页码： 3579-3584

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： TA克隆是PCR产物克隆最简单的方法,而T载体的改良对提高TA克隆效率、简化克隆片段后续的酶切、连接等实验步骤有着十分重要的意义.本研究以pMD18-T载体为基础,将原有的氨苄青霉素抗性筛选标记基因替换成卡那霉素抗性筛选标记基因,克服了原载体筛选抗性(氨苄青霉素)容易失活的问题,并在原有酶切位点的基础上增加了NsiⅠ、BsaⅠ、BglⅡ、NheⅠ和AclⅠ五个酶切位点,方便了克隆片段后续的酶切和连接操作,同时在XbaⅠ和BglⅡ之间引入了两个Eam1105I限制性核酸内切酶位点,构建成一个环状中间载体p18KT-M.利用Eam1105I酶切中间载体p18KT-M可以制备3'端带有T尾的线性化p18K-T载体.经TA克隆验证,p18K-T载体连接PCR产物的效率与原pMD18-T载体的效率相当.