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一种利用IIS型限制性内切酶进行无缝堆垒的酶促组装方法

文献类型： 中文期刊

作者： 唐焱锋 1 ; 周天顺 1 ; 刘玲 1 ; 余东 1 ; 董皓 1 ; 段美娟 1 ; 袁定阳 1 ;

作者机构： 1.湖南大学研究生院隆平分院;湖南杂交水稻研究中心,杂交水稻全国重点实验室;湖南省农业科学院;湖南农业大学农学院

关键词： 无缝堆垒;酶促组装;IIS型限制性内切酶

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2024 年 22 卷 007 期

页码： 2407-2412

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 酶切-酶连是分子组装常用的传统重组方法,但其应用受到组装效率低、限制性酶切位点少、易产生突变碱基及无法实现无缝克隆等因素制约.为克服以上限制因素,我们提出一种利用IIS型限制性内切酶进行无缝堆垒的酶促组装方法.该方法是一种利用IIS型限制性内切酶识别位点位于切割位点之外的特性,在线性化质粒载体和与目的片段同源重组过程中不会破坏识别位点,通过多轮酶促组装实现目的序列的无缝克隆的二元酶促组装方法.我们通过该方法对EAT1基因CDs序列组装验证了该方法的可行性与实用性.

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