三系杂交水稻真伪及纯度实时PCR技术的鉴定

朱水芳; 陈红运; 杨和华; 张万霞; 黄世文; 朱金国; 《农业生物技术学报 》 2007 CSCD

摘要：如何建立一套快速、准确的杂交水稻真伪及纯度检测体系一直是困扰着口岸检疫人员的难题。实时荧光PCR技术是近年来新兴的检验技术。通过对已报道的雄性不育特异片段R2-630WA进行PCR验证,发现其可作为鉴定杂交稻不育胞质的分子标记。依据此片段设计并合成1对引物和1条TaqMan荧光探针,对17个水稻(Oryza sativa)品种进行实时荧光PCR检测并对反应体系进行优化。结果表明:此探针能特异扩增三系杂交稻F1及不育系,并可准确地鉴定单粒稻种,准确率为100%。探针在测定低浓度(10%~40%)样品时偏差在2%左右,在测定高浓度(50%~100%)样品时,偏差在5%左右,能初步用于三系杂交稻的纯度检测。反应体系的最佳复性-延伸温度为60℃;最佳Mg2+浓度为3.5mmol/L,由此建立了一套准确、快速的三系杂交稻鉴定体系。

关键词： 实时荧光PCR 杂交水稻 分子鉴定 雄性不育 mtDNA R2-630WA