一种利用IIS型限制性内切酶进行无缝堆垒的酶促组装方法

唐焱锋; 周天顺; 刘玲; 余东; 董皓; 段美娟; 袁定阳; 《分子植物育种 》 2024 北大核心 CSCD

摘要：酶切-酶连是分子组装常用的传统重组方法,但其应用受到组装效率低、限制性酶切位点少、易产生突变碱基及无法实现无缝克隆等因素制约.为克服以上限制因素,我们提出一种利用IIS型限制性内切酶进行无缝堆垒的酶促组装方法.该方法是一种利用IIS型限制性内切酶识别位点位于切割位点之外的特性,在线性化质粒载体和与目的片段同源重组过程中不会破坏识别位点,通过多轮酶促组装实现目的序列的无缝克隆的二元酶促组装方法.我们通过该方法对EAT1基因CDs序列组装验证了该方法的可行性与实用性.

关键词： 无缝堆垒 酶促组装 IIS型限制性内切酶