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稻曲病菌UV-2菌株细菌人工染色体文库构建及分析

文献类型： 中文期刊

作者： 王晓明 1 ; 王革娇 1 ; 罗朝喜 2 ; 谭新球 3 ; 罗美中 1 ;

作者机构： 1.华中农业大学生命科学技术学院

2.华中农业大学植物科学技术学院

3.湖南省农业科学院植物保护研究所

关键词： 大分子DNA;细菌人工染色体;水稻;稻曲病;稻曲病菌

期刊名称： 微生物学通报

ISSN： 0253-2654

年卷期： 2013 年 40 卷 09 期

页码： 1715-1722

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】稻曲病(Rice false smut)是由稻曲病菌[Villosiclava virens(Cooke)Tak.]引起的严重危害水稻的真菌病害。构建稻曲病菌UV-2的大片段DNA细菌人工染色体(Bacterial artificial chromosome,BAC)文库,为致病相关基因的鉴定及在图位克隆、比较基因组学等方面的研究奠定基础。【方法】以幼嫩菌丝为材料制备大分子基因组DNA包埋块,用Hind III部分酶解后经脉冲凝胶电泳筛选,回收大片段DNA并与pIndigoBAC536-S载体连接,连接产物转化大肠杆菌菌株DH10B T1 Phage-Resistant细胞后进行蓝白斑筛选,白色菌落捡入384孔板置于80°C低温保存。【结果】成功构建UV-2菌株的高质量、高覆盖度的BAC文库,该文库共含10 368个克隆,平均插入片段为124.4 kb,空载率小于1%,约覆盖该菌基因组的36.8倍。【结论】克服了真菌大分子基因组DNA制备难控制的技术难题,建立了首个稻曲病菌的BAC文库。该文库已作为一种公共基因组资源向研究者开放(http://GResource.hzau.edu.cn)。

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