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表达dsRNA的细菌提取液可抑制黄瓜花叶病毒对烟草的侵染

文献类型： 中文期刊

作者： 朱春晖 1 ; 成飞雪 1 ; 何明远 1 ; 张战泓 2 ; 刘勇 1 ;

作者机构： 1.湖南省植物保护研究所

2.湖南省蔬菜研究所

关键词： 黄瓜花叶病毒;RNA沉默;双链RNA表达;细菌;保护;病毒侵染

期刊名称： 植物病理学报

ISSN： 0412-0914

年卷期： 2008 年 38 卷 03 期

页码： 304-311

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用RT-PCR分别克隆了CMV P3613株系的RNA2片段、MP(movement protein)基因片段及CMV AN株系的CP(coat protein)基因片段。以CP基因为中间间隔序列,分别构建了含有RNA2片段和MP基因反向重复片段的原核表达载体。体外转录试验表明:两个载体转录后都能形成预期大小的dsRNA。经过IPTG诱导,在大肠杆菌HT115(DE3)菌株中可表达产生预期大小的核酸片段,经DNase和RNaseA消化处理,证实为dsRNA。将表达病毒基因dsRNA的细菌超声破碎后处理烟草,进行保护和治疗试验,结果表明:表达CMV MP基因和RNA2片段dsRNA的细菌破碎液能够诱导烟草对CMV产生抗性。接种病毒60d后,保护效果试验病株率分别为45%和60%,治疗效果试验病株率分别为75%和85%,而其他对照发病率均为100%。本研究结果证明了利用RNA沉默的原理,构建具有反向重复序列的原核表达载体,用细菌表达dsRNA的粗提取物可防治CMV对烟草的侵染。

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