文献类型： 中文期刊

作者： 李玉 ¹ ; 严红 ¹ ; 马立新 ¹ ;

作者机构： 1.湖北大学

关键词： 重组融合PCR;载体构建;定点突变;原核表达载体

期刊名称： 基因组学与应用生物学

ISSN： 1674-568X

年卷期： 2012 年 31 卷 06 期

页码： 112-117

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究介绍一种多目的片段一步重组克隆的载体构建的新方法。该方法要求在PCR引物设计时,在第一个目的片段上游引物的5'端和最后一个目的片段下游引物的5'端各设置16bp与线性化目标载体末端同源的序列,再在各目的片段之间的引物上各设计25bp的重叠序列,以便进行融合PCR将多片段扩增成融合片段。此方法将融合片段与线性化骨架载体进行一步重组、转化和重组子鉴定。该方法只要求骨架载体上有一个特异性酶切位点,特别适用于插入片段中含有较多限制性酶切位点的载体构建;该方法还可以引入定点突变,可便捷构建分析启动子功能等需引入定点突变的载体;该构建方法还可以实现多基因的无缝融合构建多顺反子,在构建原核基因表达载体、叶绿体表达载体、线粒体表达载体方面有着明显优势。本研究以水稻胚乳特异性表达载体PGt1-mGFP-pSB130为例,介绍此载体构建方法。