野生稻基因组抗性基因富集文库的构建

李磊; 韩小霞; 田志坚; 邢俊杰; 李强; 崔玲玲; 张朝良; 李玲龙; 罗秀娟; 杨志刚; 李丁; 谢灵灵; 陶小平; 罗泽宇; 唐丽; 《杂交水稻 》 2008 北大核心 CSCD

摘要：通过集成候选抗性基因克隆技术和磁珠富集文库技术以及可转化基因组文库技术,提出了基于野生稻基因组富集文库克隆野生稻新抗性基因的策略。包括构建野生稻可转化基因组文库,利用RecA重组蛋白介导生物素标记的探针对文库进行磁珠富集,构建野生稻基因富集文库,然后对富集文库的克隆进行鉴定分析,包括点杂交和克隆末端测序分析,最后对富集文库的阳性克隆进行全序列测定和功能验证。按照上述方法,构建了东乡普通野生稻和小粒野生稻可转化基因组文库,库容量分别达到1.58×105和2.68×105个克隆,进而构建了东乡野生稻基因组候选抗性基因富集文库,单克隆总数1 152个,对富集文库的菌落原位杂交筛选获得12个阳性克隆,对其中5个阳性克隆全序列测定结果表明,4个阳性克隆含有已克隆抗性基因的保守序列,证实构建候选抗性基因富集文库克隆野生稻新抗性基因的策略是可行的。

关键词： 野生稻 候选抗性基因 可转化基因组文库 富集文库 新基因克隆